欧亚旋覆花总黄酮抑制糖基化终末产物诱导L929衰老及其机制研究

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第一部分探讨AGEs诱导L929衰老的最适浓度目的建立糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞(NCTC clone 929,L929)衰老模型,并探讨其相关生物学变化机制。方法实验选用L929细胞株为实验对象,随机分为6组:空白对照组(完全培养基)、0.025g/L AGEs组、0.05g/L AGEs组、0.1g/L AGEs组、0.2g/L AGEs组、阳性对照组(10g/L D-半乳糖)。通过细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测24、48、72h各组细胞增殖情况;作用48h后检测β-半乳糖苷酶染色、细胞周期分析验证L929衰老模型成立;活性氧和超氧化物歧化酶(superoxide dismutate,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)检测细胞内氧化应激水平。结果CCK-8提示AGEs可抑制细胞增殖,刺激48h细胞活力明显下降。0.025g/L AGEs组与空白对照组无明显差异,但AGEs呈浓度梯度性增高β-半乳糖苷酶活性(均P<0.01)和G1期阻滞率(均P<0.01),SOD及CAT活性降低(均P<0.01),MDA和活性氧水平增高(均P<0.01);与阳性对照组相比,0.05g/L AGEs组β-半乳糖苷酶阳染细胞数和G1期细胞数降低(均P<0.01),SOD及CAT活性增高(均P<0.05),MDA和活性氧水平降低(均P<0.05);上述实验结果提示AGEs组(0.1和0.2g/L)与阳性对照组比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论0.1g/L和0.2g/L AGEs作用48h均可建立L929体外衰老模型,这可能与细胞发生氧化应激有关。第二部分欧亚旋覆花总黄酮抑制糖基化终末产物诱导L929衰老及RAGE表达目的探讨欧亚旋覆花总黄酮(Inula britannica flower total flavonoids,IBFTF)对糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞(NCTC clone 929,L929)衰老的保护作用,和糖基化终末产物特异性受体(Receptor Advanced glycation end products,RAGE)的表达机制。方法采用0.1 g/L AGEs培养液溶液刺激离体培养的L929 48h建立衰老模型,药物组分别给予不同浓度IBFTF(0.1 g/L、0.2 g/L和0.4 g/L)继续作用6h,阳性对照组给予0.1g/L氨基胍半硫酸盐(aminoguanidine,AG)继续作用6h,空白对照组给予完全培养液。检测胞内活性氧、超氧化物歧化酶(superoxide dismutate,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平等氧化应激指标。采用细胞免疫荧光检测RAGE荧光强度,Western blot和q PCR分别检测RAGE蛋白和m RNA表达情况。结果IBFTF可显著抑制AGEs诱导L929的衰老并降低AGEs特异性受体RAGE的蛋白和m RNA表达水平(均P<0.01);不同浓度IBFTF作用于衰老的L929后,可显著提高细胞内SOD活性(均P<0.01),显著降低MDA含量和活性氧水平,具有浓度依赖性。结论IBFTF对AGEs诱导衰老的L929有保护作用,其机制可能是通过抑制RAGE表达来实现的。
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