5-HT及其5-HT2A受体在大鼠丘脑前核的表达

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目的:本实验通过观察5-羟色胺(5-HT)及其5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)在Sprague-Dawley(SD)大鼠丘脑前核的表达情况,探讨5-HT及5-HT2AR与学习记忆的关系,从蛋白水平为两者参与学习记忆提供形态学依据。方法:实验动物SD成年大鼠16只(光镜组10只,电镜组6只),雄性,体重200-250g。由大连医科大学实验动物中心提供,4%水合氯醛腹腔麻醉(1ml/100g体重),开胸暴露心脏,直视下将灌注针经左心室插至升主动脉。剪开右心耳,快速灌注生理盐水200ml直至右心耳流出液无色透明,再灌注固定液4%多聚甲醛(pH7.4)300ml(电镜标本用4%多聚甲醛-0.5%戊二醛混合液300ml),前100ml快速灌注,后200ml缓慢灌注,持续灌注约2h。灌毕立即取脑,剔除脑表面的脑膜,并置于上述新鲜固定液中4℃后固定过夜,最后在振动切片机上连续冠状切片,片厚30μm(电镜标本50μm)。切取3套,一套用于5-HT,一套用于5一HT2AR,一套做对照实验。漂浮法免疫组织化学ABC法观察5-HT及5-HT2AR在丘脑前核内的表达情况,包埋前免疫电镜技术观察丘脑前核群的5-HT能神经纤维终末。应用图像分析系统测量5-HT免疫组化阳性反应产物的平均光密度值(A),5一HT2AR免疫组化阳性神经元的平均灰度值,所有数据应用SPSS 11.5软件进行配对资料t检验。结果:1.5-HT免疫组化结果:光镜下,大鼠丘脑前核群的前、中、后部内均可见大量棕黄色的免疫反应阳性的5-HT能神经纤维终末,高倍镜下可见纤维终末走行距离较长,呈串珠状。其中背侧核(anterodorsal nucleus,AD)标记神经元着色较深,纤维密集,而腹侧核(anterovental nucleus,AV)标记神经元着色较浅,纤维稀疏。AD内的5-HT免疫反应阳性产物平均光密度值(A)与AV的5-HT免疫反应阳性产物平均光密度值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。阴性对照未见阳性表达。电镜下,可见免疫反应阳性5-HT能神经轴突终末,终末直径约(0.89±0.41)μm, (n=131),终末多为圆形或卵圆形,内含圆形突触小泡和线粒体。它们作为突触前成分主要形成非对称性轴-树突触。2.5-HT2AR免疫组化结果:在丘脑前核AD、AV内可见黄色的5-HT2AR免疫反应阳性神经元,其中AD的神经元胞体较大,着色较深,免疫反应阳性产物平均灰度值与AV的免疫反应阳性产物平均灰度值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫反应阳性产物主要定位于神经元胞膜,胞质和胞核不着色。阴性对照未见阳性表达。结论:1.大鼠丘脑前核内存在大量5-HT能神经纤维终末,在AD.AV的表达有差异。2.5-HT2AR在大鼠丘脑前核内表达,在AD.AV表达有差异。
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