论文部分内容阅读
抗菌肽作为一种具有广谱抗菌活性的多肽,对细菌、真菌、原生动物、肿瘤细胞、病毒等均有明显的抑制作用,有望替代抗生素成为新一代的抗菌活性物质。为了研究芽孢杆菌发酵豆粕产抗菌肽类活性物质的情况,本文从抗菌谱研究、抗菌活性成分确定、多肽粗提取、抗菌肽分离纯化、抗菌肽分子量测定等方面进行了深入研究。主要研究内容与结果如下:(1)经抗菌活性研究及菌种鉴定,初步确定能够产抗菌活性物质的菌株KN-BL-1和KN-BS分别是解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。其抗菌谱研究表明,KN-BL-1和KN-BS的营养肉汤发酵液、液态豆粕发酵液和固态豆粕发酵的浸提液均对S.aureus,Micrococcus tetragenus,Microbacterium sp.(B009),Brevibacterium sp.(B021)等革兰氏阳性菌有明显的抑菌效果,形成的抑菌圈直径最大达22.5mm。(2)通过酸沉淀法将KN-BL-1和KN-BS的发酵液和浸提液分成多肽粗提物和上清液两部分,并通过抗菌活性研究确定其抗菌活性成分均为多肽类物质。这些多肽粗提物对S.aureus有较明显的抑制作用,形成的抑菌圈直径最大达18.6mm,而且抑菌圈直径的大小与多肽粗提物溶液中多肽含量的相关系数均大于0.99,即多肽含量越高,抑菌圈直径越大。(3)KN-BL-1和KN-BS的发酵液和浸提液中的多肽粗提物经DEAE-Sepharose离子交换层析得到的部分层析峰样品对S.aureus有明显抑菌效果,形成的最大抑菌圈直径达23.8mm。(4)经离子交换层析得到的具有抗菌活性的峰样品分别进行Sephadex G-25凝胶过滤层析,得到五个抗菌肽组分:LB 2-③、SM 2-⑤、SM 0.2-1-②、BS-LM 0.2-3-②和BS-SM 2-④。它们对S.aureus均产生明显的抑菌效果,其中,SM 2-⑤和BS-SM 2-④形成的抑菌圈直径达19.8mm。通过质谱检测SM 2-⑤抗菌肽样品的分子量,结果显示其分子量多集中在2000Da—8000Da之间。