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联会复合体(Synaptonemal Complex,SC)是一种呈框架状结构的蛋白质复合体,在进化上十分保守,见于绝大多数物种的减数分裂中。联会复合体蛋白质(Synaptonemal Complex Protein,SCP)的表达具有严格的时间和空间特异性:它出现于减数分裂Ⅰ前期的细线期(leptotene),消失于双线期(diplotene);SC与染色体的凝缩,同源染色体的配对、重组以及双链断裂(double-strand break,DSB)的形成有关。联会复合体蛋白3(SCP3)是联会复合体蛋白的重要组成部分,是减数分裂特异表达的蛋白。本研究对绒山羊SCP3的基因序列进行了克隆和测序,并对其在早期个体中的转录水平进行了研究,最后制备了该基因产物的抗原表位多肽,并制备了多克隆抗体。首先,分别比较了人、大鼠、小鼠、牛的Scp3的序列,根据序列同源性设计相应引物,并利用绒山羊睾丸组织的cDNA作为模板,通过RT-PCR扩增得到Scp3基因890bp的序列片段,将扩增的产物连接到pMD-19T载体中进行测序,将所得的序列利用BLAST软件进行分析,结果表明,克隆的绒山羊Scp3的序列与牛的同源性可达95%以上,并且与人、小鼠、大鼠的序列相比也具有较高的同源性,通过比对确定克隆到的序列已包含了从起始密码子到终止密码子的编码区的所有序列。在克隆得到编码区序列的基础上,利用RT-PCR技术对早期绒山羊个体Scp3的mRNA转录水平进行了检测。分别取45d、56d、66d、69d、73d、86d、95d、102d、110d、122d的绒山羊睾丸组织,以GAPDH作为内部参照,对其转录水平进行检测。结果显示:56d的绒山羊睾丸组织样品检测到Scp3基因的转录表达,45d、66d和69d三个样品中没有检测Scp3基因的转录表达,从73d后的所有样品都检测到Scp3基因的转录表达。在制备SCP3抗原的实验中,对已得到的Scp3序列进行抗原表位和蛋白结构的综合分析,确定高表位的片段,进行PCR扩增。将扩增片段与原核表达载体pET-44a(+)连接,通过PCR、酶切的鉴定、以及对阳性克隆质粒的测序,证明pET-44a(+)-SCP3载体构建成功。将载体质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态菌,在1mmol/L的IPTG,诱导6小时得到SCP3的蛋白,并通过亲和层析纯化,同时通过SDS-PAGE、Western blot对表达蛋白进行检测,得到一条大小为15kDa蛋白与预计蛋白分子量大小一致,证明目的蛋白诱导成功。将SCP3抗原蛋白免疫昆明白小鼠,通过S180细胞刺激,产生腹水,得到SCP3的多克隆抗体。