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毛细管电泳(CE)是上世纪80 年代发展起来的一项重要的分离分析技术,由于其具有低成本、低消耗、低污染、高灵敏度、高分辨率、高速度等优点,符合生命科学、医学、环境科学等领域越来越苛刻的分离分析要求,得到了迅猛的发展而成为目前强有力的分析技术之一。在医学中,许多临床疾病都表现为生命体内某些组织的某些特征物质发生异常,因此对这类物质的检测具有重要意义。疾病特征物质通常含量很低,且所处的生物基质复杂,对分离分析提出了很高的要求。CE 激光诱导荧光检测法是目前最灵敏的检测方法之一,然而由于激光器的成本高、体积大、可选择的波长少等因素,制约了其发展和应用。
随着高亮度发光二极管(LED)的出现和发展,以LED 作为荧光检测装置的激发光源,可以大大减小体积和降低成本,为CE 的发展和应用提供了更广阔的前景。
运用实验室自组装的CE 光导纤维LED 诱导荧光检测装置,建立了几种疾病特征物质的分析方法,包括对羟苯乙醇胺(OCT)、犬尿氨酸(Kyn)和丝氨酸(Ser)的检测,为研究它们在人血浆和鼠脑组织中的含量变化与某些疾病的关系,提供了有效的分析手段。其主要工作有以下三方面的内容:
1. 基于CE分离和光导纤维LED诱导荧光检测,建立了一种测定OCT的新方法。OCT的柱前衍生采用2,3-萘二醛(NDA),衍生物的分离和测定由自组装的CE光导纤维LED诱导荧光检测系统完成。在背景电解液为25 mmol/L的硼砂缓冲溶液(pH 9.2)中,电压为20 kV时获得了最佳的分离。在确定的最佳条件下,OCT的检出限(S/N=3)为5.0×10-9 mol/L。OCT的浓度在1.0×10-8~5.0×10-7 mol/L范围内,与荧光强度之间呈现良好的线性关系。应用该方法测定了人血浆中OCT的含量。该方法具有分析速度快、测定灵敏度高的特点。
2. 建立了CE 光导纤维LED 诱导荧光检测Kyn 的新方法。考察了背景电解质溶液浓度及其pH 值、有机添加剂等条件对分离的影响。在确定的最佳条件下,将该方法应用于人血浆、鼠脑组织中Kyn 含量的测定。测定的人血浆中Kyn 的含量在1.8~2.4 μmol/L 范围内,其结果与文献报道的结果一致。该方法为相关疾病的诊断和治疗提供了一种有效的分析手段。
3. 运用CE 光导纤维LED 诱导荧光检测装置,完成了D/L-Ser 的手性分离。采用环糊精修饰的胶束电动色谱分离模式,考察了十二烷基硫酸钠浓度、环糊精浓度和背景电解质溶液浓度及其pH 等对D/L-Ser 分离的影响。在优化的条件下,采用光导纤维LED 诱导荧光检测,D-Ser 和L-Ser 的检出限分别为2.6×10-8 mol/L 和2.3×10-8 mol/L。运用该方法,对因注射了神经毒素而患有帕金森症的小鼠中脑组织中D-Ser 和L-Ser 的含量进行了测定。发现它们的含量可能与帕金森疾病有一定的关系。