蝴蝶兰是生长在热带及亚热带地区的兰科植物,具有极高的观赏价值和经济价值.但是近几年,蝴蝶兰软腐病的发病率较高,给蝴蝶兰的生产造成了毁灭性的危害,严重阻碍了蝴蝶兰在华南地区的推广和开发.因此,明确该病的病原菌和培养具有抗病的蝴蝶兰新品种具有重要的理论和实际意义.该论文是关于蝴蝶兰抗病基因工程的基础研究.主要对蝴蝶兰软腐病病原菌的鉴定和蝴蝶兰遗传转化体系的建立进行了探讨.研究结果如下:1.蝴蝶兰软腐病病原菌的鉴定 分离并纯化蝴蝶兰软腐病病原菌,并对其进行了致病性测定、形态观察、染色反应、培养性状观察和生理生化反应鉴定.结果表明,该菌与黄单胞菌属野油菜黄单胞菌种性状、特征相同.因此,可以初步断定,引起蝴蝶兰软腐病的病原菌是黄单胞菌属野油菜黄单胞菌.2.蝴蝶兰遗传转化体系的基础研究 运用组织培养的基本方法,研究了不同培养条件对蝴蝶兰原球茎的诱导、增殖、出苗的影响.研究表明:在散射光下用幼叶诱导原球茎的效果最好.卡那霉素对转化的蝴蝶兰原球茎的筛选适宜浓度为80mg/L.200mg/L的头孢霉素可在农杆菌介导的遗传转化中有效抑制残余农杆菌的生长.用农杆菌介导法和农杆菌辅助的超声波转化法对原球茎进行遗传转化,切割成片状的原球茎比未经切割的原球茎的转化效率显著提高,未切割的原球茎几乎观察不到瞬时表达.农杆菌介导的转化法时,侵染时间为6h时,瞬时表达的效率最高为50%;超声波辅助的农杆菌介导转化法,侵染时间为15min时,瞬时表达的效率最高为30%.运用分子克隆的常规方法,构建了含AP-D基因的表达载体.