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本文主要研究了激活液中Ca2+浓度对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活的影响,以筛选出最佳的Ca2+浓度;研究了猪体外成熟卵母细胞电激活后的体外培养体系,比较了不同培养方式、不同激活液等对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响;通过形态观察和Hoechst33342染色,初步探明了猪成熟卵母细胞体外凋亡的规律。 激活液中Ca2+浓度对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活影响的实验中,Ca2+浓度在0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mmol/L 5个浓度梯度中,卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数差异不显著(p>0.05),但0.9 mmol/L时囊胚率最高(13.46±5.95);Ca2+浓度在0.0~8.0mmol/L中,发现0.0~2.0 mmol/L卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数差异不显著(p>0.05),但1.0 mmol/L时囊胚率最高(13.98±2.63),再进一步提高激活液中Ca2+浓度会显著降低囊胚率,但对囊胚细胞数影响不大,激活液Ca2+浓度提高到6.5 mmol/L以上,囊胚率已经小于5%。 猪体外成熟卵母细胞电激活后的体外培养体系实验中,实验1(激活后卵子随机分3组培养:分别移入NCSU23培养液、G2.2-aa培养液、G2.2培养液中各培养7d)的3个组卵裂率差异不显著(p>0.05),NCSU23囊胚率(14.37±3.77)显著高于G2.2、G2.2-aa组,且差异极显著(p<0.01),但它们的囊胚细胞数差异不显著(p>0.05)。试验2(激活后卵子随机分为4组培养:NCSU23不换液培养7d;NCSU23液培养72h后移入G2.2液培养到7d;G2.2液培养72h后移入G2.2液培养到7d;G2.2液培养72h后移入NCSU23液培养到7d)中,4个组卵裂率差异不显著(p>0.05),但第3组卵裂率(61.81±3.79)最高,其次是第4组(58.94±1.71),第1组囊胚率(12.50±1.49)显著高于其它组,差异显著(p<0.05),但它们的囊胚细胞数差异不显著(p>0.05)。实验3(激活后卵子随机分为5组培养:NCSU23液培养7d;G2.2-aa培养7d;G2.2-aa添加亚牛磺酸和半胱氨酸培养7d;G2.2-aa添加胰岛素培养7d;G2.2-aa添加胰岛素,亚牛磺酸和半胱氨酸培养7d)中,卵裂率在5个组中差异不显著(p>0.05),第1组囊胚率(12.24±1.63)高于其它4组,与第2组差异极显著(p<0.05),与第3、4、5组差异显著(p<0.05),且第3、4、5组显著高于第2组,囊胚细胞数差异不显著(p>0.05)。 猪成熟卵母细胞体外凋亡的观察实验中,在未激活组中,胞质不均匀分裂是主要的趋势,高于坏死和胞质均匀分裂;胞质不均匀分裂在24h出现,在24~96h时间段猪体外成熟卵母细胞孤雌激活及凋亡观察有较大的增幅,最高胞质不均匀分裂率出现在132h;胞质均匀分裂在12h出现,在24一72h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在1 20h,之后略有下降;坏死在12h出现并持续增加,在24一108h增幅较大,18Oh坏死率为28.6%。孤雌激活组中,胞质均匀分裂是主要趋势,但60h后坏死率高于胞质不均匀分裂;胞质均匀分裂在12h出现,在24荀0h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在60h,并出现了5.6%的囊胚发育率:胞质不均匀分裂在24h出现并持续增加,在24一72h时间段有较大的增幅,180h的胞质不均匀分裂率为15.4%;坏死在12h出现,在24一108h增幅较大,1 80h之间的坏死率为39,6%。未激活组胞质不均匀分裂形态明显高于孤雌激活组,%h后差异显著勿<0.05);孤雌激活组胞质均匀分裂形态高于未激活组,60h后,两组差别显著勿<0.05):孤雌激活组坏死形态高于未激活组,96h后两组出现明显差异勿<欣05)。