背景：　　胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma，简称PDAC）近些年来，无论是在中国还是西方发达国家，发病率呈现出逐年的上升趋势。众所周知，PDAC的恶性程度很高、侵袭性很强，其患者5年期生存率不到6%。尽管在医学专家及科研人员的不懈努力下，在诸多领域内出现了一些进步，比如外科手术、化疗、靶向药物和放疗的领域，但目前看来PDAC患者的预后仍然非常不容乐观。截止目前外科手术切除仍是当前PDAC治疗中最有效的治疗方法。因此，如何提高对PDAC侵袭、转移机理的认识，如何对PDAC患者的预后精确分层，今后很长一段时间来讲，对于PDAC治疗效果的提高，精准识别，都颇有意义。　　众所周知，组织低氧（Hypoxia）是PDAC生长的重要微环境之一。HIF-1α（Hypoxia-inducible factor-1α）是在组织处于低氧状态时因适应性而产生的一类转录因子，能与具有特异性的低氧反应元件（hypoxia-responsive element，HRE）（5，-RCGTG-3，）特异性结合；而且低氧反应元件HRE区在与HIF1α相互作用中一直处于保守状态结合。国内外有众多课题组的大量研究显示：HIF-1α在PDAC组织中呈现出高表达状态，而且介导了大量的适应性病理反应与生理反应，其与PDAC的纤维化过程（Fibrosis）、血管生成过程（Angiogenesis）、细胞侵袭过程（Invation）等肿瘤的进展危险因素都密切相关。HIF-1α在参与细胞低氧调控的转录因子中，其作用是非常强的，而且也是比较核心的，因而被国内外科研人员广泛、深入的研究。有诸多的科研机构研究分析发现，HIF-1α在PDAC组织中呈高表达状态，而在正常胰腺实质组织（Parenchymal tissue）中却很难发现HIF-1α的表达，从而研究人员不难推测出HIF-1α很有可能在PDAC恶性表型的进展中发挥了作用。而且也有研究人员发现在PDAC发生侵袭转移（Metastasis）的过程中，HIF-1α可能诱导了多种侵袭转移相关因子和不同酶类的恶性表达，从而使肿瘤细胞的表型发生了巨大转变，最终发生了PDAC的局部侵袭和远处转移。　　MAN2A1（mannosidase,alpha,class2A,member1，简称MAN2A1），属于Ⅱ类α-甘露糖苷酶，有研究指出其在恶性肿瘤细胞的预后不良中发挥了巨大作用。如何进一步认识理解该因子，如何明确其在PDAC中发挥的恶性作用，对于进一步认识MAN2A1及PDAC具有重要意义，或在未来有可能成为肿瘤治疗新靶点。在课题组的前期工作中已经揭示，MAN2A1蛋白在PDAC中，相较于正常胰腺组织及细胞系来说，其表达水平更高而且与PDAC的不良预后密切相关。故而课题组设计了本实验，拟从临床、细胞分子等诸多水平探索PDAC中MAN2A1的功能、意义、调控机制，从而加深对MAN2A1及PDAC的认识，提高对PDAC的诊治水平。　　方法：　　1.应用PDAC组织石蜡切片标本，进行HIF-1α、MAN2A1地连续切片免疫组化染色（IHC），分析MAN2A1的不同表达程度和HIF-1α表达的相关性；进一步搜集临床病例资料及预后随访资料，分析MAN2A1表达水平与临床病理学参数之间的关系。　　2.应用Western blot等实验技术检验不同处理（乏氧、常氧条件下及不同处理HIF-1α条件下）PDAC细胞系中MAN2A1的表达水平；应用免疫荧光技术（IF）检验MAN2A1在PDAC细胞中的细胞表达及定位。　　3.应用瞬转小RNA干扰技术，以及分子克隆的方法，构建HIF-1α及MAN2A1过表达质粒和HIF-1α、MAN2A1shRNA降表达质粒，以构建不同分子表达的细胞系；用Western blot等检验方法，鉴定HIF-1α、MAN2A1等不同表达的细胞系；应用TRANSWELL迁移、侵袭实验及划痕实验检验所构建细胞表达MAN2A1的不同生物学功能。　　4.应用Western blot、CHIP及免疫荧光实验检验HIF-1α与MAN2A1启动子HRE区结合情况，及分析HIF-1α调控MAN2A1基因转录激活的能力，及调控靶标的分子机制。　　5.尝试构建裸鼠胰腺原位肿瘤细胞转移模型；体内验证MAN2A1促PDAC转移的作用。　　结果：　　1.在人PDAC切片组织中、新鲜肿瘤组织中及PDAC细胞系中，MAN2A1呈现胞浆高表达，并连续切片组织IHC分析与HIF-1α的表达具有相关性（rs=0.359）。MAN2A1的表达与PDAC的淋巴结（LN）转移相关，并与预后呈负相关。　　2.低氧处理人PDAC细胞系，可以诱导MAN2A1在mRNA和蛋白水平的表达上调；通过RNAi干扰技术沉默HIF-1α的表达，可以抑制MAN2A1的表达。CHIP及双荧光素酶实验显示，HIF-1α可以结合于MAN2A1基因启动子HRE区，并可以上调MAN2A1启动子区的活性，激活转录活性。　　3.通过RNAi干扰技术沉默MAN2A1的表达可以引起人PDAC迁移侵袭能力下降；而过表达MAN2A1，可以使其能力提升。通过Wetsern blot分析，MAN2A1可以上调Vimentin的表达，减少E-cadherin的表达，引起WNT/SNAIL信号通路的激活，通过上皮间质转化（EMT），引起PDAC迁移侵袭能力的加强。　　4.裸鼠胰腺癌原位成瘤转移模型构建失败；未能完成体内动物实验。　　结论：　　1.MAN2A1蛋白在人PDAC切片组织、新鲜组织及细胞系中表达量异常升高；PDAC组织中，MAN2A1表达水平较高的患者预后更差。　　2.在PDAC细胞系中，MAN2A1降表达后，抑制了WNT/SNAIL信号通路，波形蛋白（Vimentin）的表达下调，E-钙粘附蛋白（E-cadherin）的表达上调，逆转了上皮间质转化（EMT），从而抑制肿瘤的转移能力。