雷洛昔芬对GH3细胞Seladin-1基因表达与细胞增殖和凋亡的影响

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目的:探讨选择性雌激素受体拮抗剂雷洛昔芬对大鼠垂体瘤GH3细胞株seladin-1基因表达及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,分析seladin-1基因的功能及其在垂体瘤发生和发展中的调控机制,进一步为垂体腺瘤的药物干预,以seladin-1为靶点的基因治疗和药物治疗提供试验依据。方法:大鼠垂体瘤GH3细胞常规在37℃、5%CO2、100%湿度的孵箱中培养,以不同浓度(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmoi/L)的雷洛昔芬作用于大鼠垂体瘤GH3细胞,培养48小时后检测雷洛昔芬的作用效果;以western blot检测seladin-1基因在不同浓度药物下蛋白表达、荧光定量RT-PCR检测seladin-1基因在不同浓度药物下seladin-1mRNA表达、Cell Counting kits-8(CCK-8)试剂盒检测不同浓度药物对肿瘤细胞增殖的影响和TUNEL试剂盒检测不同浓度药物对大鼠垂体瘤GH3细胞凋亡的不同影响。结果:1.雷洛昔芬在10nmol/L-1000nmol/L的浓度范围抑制seladin-1mRNA表达(P<0.05),在10nmol/L~100nmol/L, GH3细胞seladin-1mRNA表达下降最显著,0.1nmol/L、1nmol/L组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.雷洛昔芬在所有实验组均抑制seladin-1基因蛋白表达(P<0.05),在0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L组表现为,随着药物浓度的升高,GH3细胞seladin-1蛋白表达呈现下降趋势(P<0.05),而在100nmol/L、1000nmol/L表现为,随着药物浓度的升高,GH3细胞seladin-1蛋白表达呈上升趋势(P<0.05),在100nmol/L实验组,GH3细胞seladin-1蛋白表达下降最为明显。3.雷洛昔芬在10~1000nmol/L实验组能够抑制GH3细胞生长(P<0.05),在10~100nmol/L实验组抑制最显著,0.1~1nmol/L实验组未见明显抑制,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)4TUNEL试剂盒检测雷洛昔芬在10~1000nmol/L浓度对大鼠垂体瘤GH3有效诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论:1.雷洛昔芬能够抑制大鼠垂体瘤GH3细胞株seladin-1mRNA和蛋白的表达,并且在10~1000nmol/L浓度范围均受到抑制,抑制程度二者表现有一致性;2.雷洛昔芬能够抑制大鼠垂体瘤GH3细胞株的生长,抑制肿瘤细胞增殖;3.雷洛昔芬能够诱导肿瘤细胞凋亡增加,且凋亡率高于瘤细胞的增殖抑制率;4.雷洛昔芬通过作用于大鼠垂体瘤GH3细胞selandin-1能够抑制垂体瘤的生长,增加瘤细胞的凋亡,从而抑制垂体腺瘤的发生和发展,seladin-1有望成为垂体瘤药物治疗和基因治疗的新靶点。
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