【摘 要】
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目的:近年来细胞治疗得到了快速发展,为临床疾病带来了新的治疗方式。然而,如何在活体条件下长期监测移植治疗细胞的命运,仍是细胞治疗以及分子影像领域亟待解决的难题。本研究在前期重组NIS基因杆状病毒移植细胞显像监测的基础上,进一步探讨融合睡美人转座子的杆状病毒介导NIS基因（Bac-NIS-SB-NeoR）进行移植细胞长期监测的可行性,以及通过放射性核素标记GLP-1类似物进行移植胰岛β细胞长期实时监
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目81171367,81471688,81671720；
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目的:近年来细胞治疗得到了快速发展,为临床疾病带来了新的治疗方式。然而,如何在活体条件下长期监测移植治疗细胞的命运,仍是细胞治疗以及分子影像领域亟待解决的难题。本研究在前期重组NIS基因杆状病毒移植细胞显像监测的基础上,进一步探讨融合睡美人转座子的杆状病毒介导NIS基因（Bac-NIS-SB-NeoR）进行移植细胞长期监测的可行性,以及通过放射性核素标记GLP-1类似物进行移植胰岛β细胞长期实时监测的可行性,为细胞移植监测提供新的模式。方法:将转座酶（SB100X）与IR/DR序列构建到杆状病毒同源重组臂Tn7L与Tn7R之间,成功构建了含eGFP与NIS报告基因的两种质粒pFastBac-eGFP-SB-NeoR与pFastBac-NIS-SB-NeoR,并将其分别转化到DH10Bac感受态菌中得到杆粒;然后通过脂质体转染Sf-9昆虫细胞,制备出第一代重组杆状病毒Bac-eGFP-SB-NeoR及Bac-NIS-SB-NeoR,并进行扩增;将扩增后的重组杆状病毒分别感染人胶质瘤细胞（U87）并进行G418硫酸盐抗性筛选,获得稳转细胞Bac-eGFP-SB-NeoR-U87及Bac-NIS-SB-NeoR-U87。通过流式细胞仪分别测定Bac-eGFP-SB-NeoR-U87及对照组细胞的eGFP阳性率;同时对Bac-NIS-SB-NeoR-U87细胞进行动态摄碘以及高氯酸钠抑制实验。对Bac-NIS-SB-NeoR-U87细胞中NIS的mRNA、蛋白以及摄碘进行长期不同时间测定。最后将体外培养28周的Bac-NIS-SB-NeoR-U87细胞移植到裸鼠体内并进行不同时间SPECT显像监测的研究。此外,采用Iodogen法进行GLP-1类似物利拉鲁肽（Liraglutide）的125I标记,将标记的125I-Liraglutide与胰岛素瘤INS-1细胞进行体外饱和实验及竞争结合实验;并使用125I-Liraglutide对胰岛素瘤模型鼠进行小动物SPECT/CT显像和体内脏器放射性分布测定。同样采用Iodogen法进行鸢尾素（Irisin）的125I标记,将标记的125I-Irisin注射到C57/B16小鼠体内进行不同时间小动物SPECT/CT显像,并进行各脏器放射性分布测定。结果:成功制备了滴度分别为8.68í10~8与4.01í10~8 pfu/mL的两种重组杆状病毒Bac-eGFP-SB-NeoR及Bac-NIS-SB-NeoR,并建立G418筛选后的稳转细胞系Bac-eGFP-SB-NeoR-U87及Bac-NIS-SB-NeoR-U87。流式细胞仪检测结果显示Bac-eGFP-SB-NeoR-U87在感染后第1、18、53及196天的eGFP阳性率分别为64.27±3.64%、96.03±0.21%、97.50±1.00%及97.43±0.81%,而对照组细胞第18天的eGFP阳性率几乎为0。体外动态摄碘显示,Bac-NIS-SB-NeoR-U87细胞摄取125I-逐渐增高,45 min达高峰;且细胞摄碘可被高氯酸钠抑制。Bac-NIS-SB-NeoR-U87细胞中NIS长期表达的研究显示其mRNA水平、蛋白水平以及摄碘随时间均未见变化。体内131I SPECT显像可见,Bac-NIS-SB-NeoR-U87移植后的第20、28及43天细胞移植部位均可清晰显影。此外,成功进行了Liraglutide的125I标记,标记率约95%;125I-Liraglutide与GLP-1受体结合的平衡解离常数Kd值为128.8±30.4 nmol/L,半抑制率IC50值为542.4±187.5 nmol/L。小动物125I-Liraglutide SPECT/CT显像可见胰岛素瘤清晰显示。125I标记Irisin(125I-Irisin)小动物SPECT/CT显像见胆囊明显显影,其次肝脏和肾脏显影,为受体显像探针筛选进行了有益探讨。结论:Bac-NIS-SB-NeoR显像系统对移植细胞长期监测以及核素标记Liraglutide对胰岛β细胞移植长期实时监测均具有可行性,为移植细胞监测提供了多模式显像方法。
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