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目的利用篮式生物反应器进行vero细胞、森林脑炎病毒的高密度培养,探索森林脑炎病毒灭活疫苗制备工艺。森林脑炎病毒液经超滤浓缩、β-丙内酯灭活、柱层析纯化,为生物反应器制备森林脑炎病毒灭活疫苗的生产工艺和生物反应器大规模培养工艺积累经验。方法使用5L、14L篮式生物反应器配合片状载体培养vero细胞,在细胞培养阶段,检测平台期细胞密度,并从生物反应器接种细胞量、灌流速度、培养液等方面优化vero细胞的培养条件。病毒培养阶段,检测病毒滴度变化,并通过病毒感染复数、维持液小牛血清浓度、培养基灌流速度等方面优化病毒培养条件,从而提高病毒收获液病毒滴度,并使病毒收获维持较长的时间。在整个生物反应器培养过程中,检测培养液中PH、DO葡萄糖浓度、乳酸浓度、渗透压的变化,通过这一系列的指标来确定生物反应器细胞培养和病毒培养的参数。收获的病毒液超滤浓缩、灭活后,经Sepharose 4FF柱层析纯化得到疫苗原液,按照《中国药典》三部(2010版)进行相关检测。结果经反复试验,得到比较适合生物反应器大规模培养条件为:细胞培养阶段PH为7.2,DO为50~60%,vero细胞的最佳接种量为5~7.5×105cell/ml;病毒培养阶段PH为7.4,DO为45~55%,病毒的最佳感染复数为0.1~0.04。细胞到达平台期时最高细胞密度可达到1.04×107cell/ml;病毒感染后,约3天左右病毒滴度可以达到8.0 log LD50/m L,每日病毒收获约一个罐体积,收获时间可达30~35天,平均病毒滴度为8.4 log LD50/m L。将森脑病毒液通过截留分子量为300KD的Millipore膜包进行超滤浓缩,按0.025%(体积比为1:4000)加入β-丙内酯在4℃灭活48小时可灭活完全。经Sepharose 4FF柱层析纯化后得到疫苗原液,其杂蛋白去除率高达87.7%,其中抗原含量、小牛血清白蛋白、vero细胞宿主蛋白的残留量均符合药典规定。结论利用生物反应器进行Vero细胞培养制备森林脑炎病毒,条件易于控制,能大量节约劳动成本,有效减少污染的机率,能得到较高的细胞密度并获得高毒力的病毒收获液,为生物反应器制备vero细胞森林脑炎病毒灭活疫苗生产工艺奠定了基础。