论文部分内容阅读
目的：本实验将成年大鼠的骨髓细胞采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)进行培养、传代,并选取BMSCsCD44及CD45抗原表型来鉴定获得干细胞,然后注入大鼠失神经肌肉模型的神经断端,观察骨髓间充质干细胞对失神经支配骨骼肌萎缩的防治作用,并为临床治疗提供新的理论依据。方法：1取SD大鼠1只,无菌条件下取股骨和胫骨的骨髓细胞,将骨髓细胞用percoll分离液(比重1.077)分离骨髓间充质干细胞的单个核细胞,然后将单细胞悬液接种于含15%小牛血清DMEM培养基进行培养、纯化和扩增。描画出MSCs生长曲线,通过免疫组化法检测干细胞CD44、CD45表面标志物。2选取健康SD大鼠36只,切断左侧后肢坐骨神经制备神经缺损模型,随机分为观察组和对照组,观察组肌肉注射1.5×105个/ml的骨髓间充质干细胞悬液0.2 ml,对照组注入同等剂量低糖DMEM培养液,分别于2、4、6周后对2组大鼠进行大体观察、检测肌湿重、肌纤维横截面积、坐骨神经指数(SFI),免疫组织化学法检测肌肉组织Bcl-2、Bax的表达变化。结果：利用密度梯度离心结合贴壁筛选法能有效分离纯化BMSCs,培养出的细胞均具有典型的干细胞形态特征,传代后细胞增殖速度较快。BMSCs标志物CD44呈阳性表达,造血干细胞标志物CD45阴性表达。造模后2、4、6周,观察组大鼠腓肠肌湿重、腓肠肌纤维横截面积均显著高于对照组,SFI则显著高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。术后2、4、6周,观察组肌肉组织中Bcl-2阳性细胞表达强度均高于对照组,Bax阳性细胞表达强度均低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：1.用密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离出纯度较高的BMSCs,并具有良好的增殖速度,体外培养的后的BMSCs可进行体内移植,并在局部损伤微环境中发挥作用。2. BMSCs可提高失神经后骨骼肌湿重和肌纤维横截面积,并上调Bcl-2的表达,抑制Bax的表达,从而减少肌细胞凋亡,延缓失神经支配骨骼肌萎缩,对失神经骨骼肌具有保护作用。