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川东獐牙菜(Swertia davidi Franch)属龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)植物,为我国一种珍稀中草药药材,民间俗称水黄连、鱼胆草、青鱼胆草、水灵芝等,用于治疗黄疸型肝炎、痢疾、肺炎、扁桃体炎及妇科炎症等疾病。本论文对川东獐牙菜中口山酮类成分和环烯醚萜类成分提取工艺,主要成分的分离纯化、结构确证、标准品标准、含量测定方法、抗乙肝病毒体外活性进行了研究,结果如下:1、川东獐牙菜总口山酮萃取新工艺优化采用均匀设计对超临界CO2萃取方法进行工艺优化,结果表明:超临界CO2萃取川东獐牙菜总口山酮的最佳条件是萃取温度50℃,夹带剂乙醇浓度为100%(用量为1.2 L·kg-1药材),萃取压力为35 MPa,夹带剂流速为4.5 mL·min-1,总口山酮萃取率为0.230%。该工艺与采用有机溶剂提取方法比较,具有经济、环保、效率高和成本低的特点。2、川东獐牙菜环烯醚萜类成分提取工艺优化采用正交设计对水煎煮提取法进行工艺优化,结果表明:水煎煮提取川东獐牙菜环烯醚萜类成分的最佳提取时间为3 h,提取温度为80℃,料液比为10,提取次数为3次,其中有效成分苦龙苷提取率达0.314%。该工艺的稳定性和重现性较好。3、川东獐牙菜口山酮类成分和环烯醚萜类成分结构确证经过反复研究,优选出了硅胶G柱层析及微晶纤维素柱层析联用进行化合物A的分离纯化,硅胶G柱层析与制备薄层联用进行化合物B的分离纯化,硅胶G柱层析与Sephadex LH-20联用进行化合物C的分离纯化,大孔树脂AB-8与硅胶G柱层析进行化合物D的分离纯化。采用上述方法分离纯化获得化合物A、B、C和D,经理化性质测定和波谱解析,分别鉴定为去甲基雏菊叶龙胆酮(demethylbellidifolin),1,8-二羟基-3,5-二甲氧基口山酮(Swerchirin),獐牙菜苦苷(swertiamarin)和苦龙苷(amarogentin),在此基础上完成了对照品制备。4、川东獐牙菜口山酮类成分和环烯醚萜类化学成分的测定方法研究经过反复试验,筛选了HPLC测定川东獐牙菜中口山酮类成分和环烯醚萜类成分含量的最佳方法。去甲基雏菊叶龙胆酮色谱条件:色谱柱:Hypersil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测波长:254nm;流动相:甲醇-0.5%磷酸水(56:44);流速:1 mL·min-1;柱温:室温;川东獐牙菜药材中去甲基雏菊叶龙胆酮含量为0.752～0.770 %;1,8-二羟基-3,5-二甲氧基口山酮色谱条件:色谱柱:Hypersil C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(76:24);检测波长:254 nm;流速:1 mL·min-1;柱温:室温;川东獐牙菜药材中1,8-二羟基-3,5-二甲氧基口山酮的含量为0.099～0.116%;獐牙菜苦苷色谱条件:色谱柱:Hypersil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:甲醇-水(25:75);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm;川东獐牙菜药材中獐牙菜苦苷的含量为3.62～3.64%;苦龙苷色谱柱:Hypersil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:甲醇-水(50:50);流速1.0 mL·min-1;检测波长:227 nm;川东獐牙菜药材中苦龙苷的含量为0.327～0.341%。5、川东獐牙菜抗乙肝病毒主要活性成分的体外活性评价观察了川东獐牙菜中去甲基雏菊叶龙胆酮和苦龙苷在乙型肝炎病毒转染的人肝癌细胞2.2.15细胞系培养中对细胞的毒性,对HBsAg和HBeAg分泌的抑制作用。发现去甲基雏菊叶龙胆酮对2.2.15细胞培养上清液中分泌的HBsAg和HBeAg有较强抑制作用,量效关系明显。苦龙苷对2.2.15细胞培养上清液中分泌的HBeAg有较强抑制作用,呈量效关系,高浓度对HBsAg有强抑制作用。