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目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)与不同浓度的促红细胞生成素(EPO)共同作用对体外培养的海马来源的神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)增殖和分化的影响。
方法:采用添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养体系中培养、传代NSCs。实验分对照组、IGF-1组、不同浓度的EPO组及IGF-1+EPO联合组,将传3代的NSCs的分别加入各组中。分别于培养的第3天、第5天、第7天利用Typanblue染色细胞直接计数法计数;同时培养7天时,采用免疫细胞化学染色、免疫荧光技术检测其Brdu、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP),观察NSCs细胞的生长增殖及分化状况并作统计学分析。
结果:与对照组相比,各组NSCs均有良好生长趋势,细胞球体积逐渐增大,细胞密度增大,数目逐渐增多。于培养的第3天、第5天、第7天各组之间细胞计数及培养第7天Brdu阳性率比较:各组均高于对照组(P<0.05)。IGF-1+100U/mlEPO联合组明显高于各组,其中IGF-1+10U/mlEPO联合组与单独IGF-1组无明显差异(P>0.05)。在EPO各浓度组中,各组均高于对照组,低于单独IGF-1组,1000U/mlEPO组与100U/mlEPO组高于10U/mlEPO组,但1000U/mlEPO组与100U/mlEPO组二组间无明显差异(P>0.05)。在分化方面,各组NSE阳性细胞率均高于对照组(P<0.05),对照组GFAP阳性细胞率高于各实验组(P<0.05)。IGF-1+100U/mlEPO联合组NSE阳性细胞率最高、GFAP阳性细胞率最低。除单独IGF-1组与IGF-1+10U/mlEPO联合组之间以及1000U/mlEPO组与100U/mlEPO组之间(P>0.05),各组在NSE阳性细胞率、GFAP阳性细胞率比较上均有显著性差异(P<0.05)。
结论:胰岛素样生长因子-1和不同浓度的EPO具有增强NSCs体外增殖的作用,二者都有促其向神经元分化、抑制向星形胶质细胞方向分化的作用,EPO此种作用无剂量依赖性,且IGF-1和EPO具有协同效应。