癌基因DJ-1在胃癌干细胞中的表达及其作用研究

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目的:研究癌基因DJ-1在胃癌干细胞(GCSC)中的表达情况及其肿瘤干细胞特性。方法:悬浮培养法富集胃癌干细胞,利用RT-PCR检测DJ-1的表达量,从胃正常细胞中克隆出DJ-1基因,通过慢病毒转染技术构建并筛选过表达DJ-1的胃癌干细胞(p LV-DJ-1组)及干扰表达的胃癌干细胞(si DJ-1组)。采用RT-PCR和Western blot技术检测稳定转染DJ-1胃癌干细胞中DJ-1 m RNA和蛋白质表达量,并比较其与空载体组和空白对照组的差异;通过MTS法检测转染后胃癌干细胞生存及生长情况,并绘制生长曲线比较转染后干细胞增殖变化;运用单因素方差分析比较转染后细胞成瘤能力。结果:(1)癌基因DJ-1在胃癌MGC-803细胞中表达量最高。(2)DJ-1在胃癌干细胞中高表达。(3)过表达DJ-1重组质粒转染胃癌干细胞,实验组(p LV-DJ-1组)胃癌干细胞DJ-1 m RNA和蛋白质表达量升高;干扰DJ-1重组质粒转染胃癌干细胞,实验组(si DJ-1组)胃癌干细胞DJ-1 m RNA和蛋白质表达量下降。(4)过表达DJ-1组细胞增殖能力增强;干扰表达DJ-1组细胞增殖能力减弱。(5)p LV-DJ-1组细胞自我更新速率加快,成瘤能力增强,p LV-DJ-1组与空载体组成瘤率之比为30.53%±0.82%vs 15.8%±0.52%,P<0.001;si DJ-1组细胞增殖速率减慢,成瘤能力降低,si DJ-1组与空载体组成瘤率之比为7.80%±0.37%vs 15.50%±0.63%,P<0.05。结论:DJ-1基因在胃癌干细胞中高表达,且能促进胃癌细胞的增殖和自我更新能力,DJ-1可能是胃癌干细胞潜在的细胞表面标志物,靶向杀伤胃癌干细胞可能为胃癌的治疗提供一个新的思路。
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