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目的:Alport综合征是一种以进行性肾功能衰竭、感音神经性耳聋以及眼部异常为特征的遗传性疾病。col4a3基因敲除鼠是Alport综合征的疾病模型,已在肾、耳部得到认证,但是眼部却鲜有研究。本次试验将通过免疫组化实验检测野生型小鼠与col4a3基因敲除鼠视网膜基底膜(Bruch’s membrane)部IV型胶原蛋白α链的分布、以及其他相关成分的分布情况,对比两种小鼠的异同;以及通过电子显微镜及组织学技术来验证col4a3基因敲除鼠的视网膜Bruch’s membrane是否有异常表现,检测col4a3基因敲除鼠视网膜色素上皮细胞层和视细胞是否存在损害,以此来初步推测col4a3基因敲除鼠是否能成为Alport综合征眼部视网膜病变的动物模型。研究方法:1.通过免疫组化实验检测野生型小鼠与col4a3基因敲除鼠视网膜基底膜(Bruch’s membrane)部IV型胶原蛋白α链分布、以其他相关成分的分布情况,对比两种小鼠IV型胶原蛋白α链以及其他相关组成成分的异同。2.通过透射电子显微镜及组织学技术对比观察col4a3基因敲除鼠与野生型小鼠,来检验col4a3基因敲除鼠的视网膜Bruch’s membrane是否有异常表现,同时检测col4a3基因敲除鼠视网膜色素上皮细胞层和视细胞是否存在损害。结果:1.免疫组化实验结果显示,在野生型小鼠视网膜基底膜(Bruch’s Membrane)中可表达α1(IV)、α2(IV)、α3(IV)、α4(IV)、α5(IV)IV型胶原蛋白链的分布,且信号较强;而col4a3基因敲除鼠视网膜基底膜(Bruch’s Membrane)中仅表达α1(IV)与α2(IV)IV型胶原蛋白链的分布,且信号明显减弱。2.透射电子显微镜检测发现,与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠的Bruch’s Membrane明显变薄、RPE细胞之间连接松散、微绒毛结构明显改变、基底皱褶部分消失。3.组织学技术(HE染色)结果发现,与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠的RPE层明显变薄(P<0.001)。4.免疫组化实验结果显示:(1)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠RPE65信号明显改变:RPE色素颗粒分布不均匀且色素颗粒数量明显减少;(2)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠Ezrin信号在RPE层微绒毛结构处明显改变;(3)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠GFAP信号在视网膜内界层到外界层之间明显增强;(4)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠Fibronectin信号在RPE层稍有增强;(5)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠Laminin5信号在Bruch’s Membrane处稍有减弱;(6)与野生型小鼠相比,col4a3基因敲除鼠Albumin信号明显改变,充斥RPE全层且信号增强。结论:col4a3基因敲除确实会在小鼠视网膜产生病变,初步认为col4a3基因敲除鼠可以作为Alport综合征眼部视网膜病变的动物模型。