恶性肿瘤是给人类健康带来重大危害的疾病之一,其危害日趋严重,已经成为人类的第一杀手。由于环境恶化、生活压力增加等众多因素,我国恶性肿瘤患病形式尤为严峻,恶性肿瘤发病率逐年攀升。其中胃癌作为常见的恶性肿瘤之一,占消化道恶性肿瘤第一位。早期诊断是胃癌治疗的关键,但其早期症状不明显,早期诊断困难较大,很大程度影响了胃癌的治疗效果。如寻找到特异肿瘤标志物,则对胃癌的早期诊断及筛查具有深远意义。单核苷酸多态性(SNP)是人类中最常见的单碱基突变,在已知遗传多态性中的比例在90%以上。也是人类基因组的遗传标记中密度最大,发生频率较高,能够作为新一代遗传学标记的突变形式。在医学遗传学、药物遗传学、个体化医学、疾病遗传学、疾病诊断学等研究领域具有重要的研究价值和应用前景。近年来,众多研究发现不同基因的SNP位点与癌症的发生、发展有着密不可分的关系。利用SNP作为癌症早期检测的生物标志具有较高可行性。目前SNP主要研究方法有构象多态性、变性梯度凝胶电泳酶切法、限制性片段长度多态性、TaqMan探针法等,但都存在通量低、无法实现自动化、检测成本较高等劣势,无法应用于大规模自动化筛选。MassARRAY系统是利用质谱检测技术来进行核酸分析的多功能系统,完美地整合了PCR技术的高灵敏度和质谱技术的高精确度。具有位点选择灵活、检测结果准确、检测通量高、反应成本低等优势,顺应了当前医学疾病基因组疾病机制研究迅猛发展的趋势。本课题拟利用检测基因SNP与胃癌发病关性研究,检测人胃癌石蜡包埋组织SNP频率,探讨SNP与胃癌发病的关系,评价SNP作为胃癌早期诊断、早期筛选肿瘤标志物的可能性。本课题选择了APC、KRAS、PIK3CA、PTEN、CTNNB1、EGFR、TP53、AKT、ERBB2、PSCA共10个基因27个位点,从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组DNA,使用Assay Designer引物设计软件设计的引物及探针对目的基因片段扩增,然后利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测。发现了APC、KRAS、PIK3CA、PSCA和PTEN 5个基因中的8个SNPs位点在胃癌组织具有异常高的突变频率。为了补充研究MassARRAY分子量阵列分析系统不能完成的任务,建立多位点突变一次检测的方法,为诊断研究奠定基础,我们利用PYRO ASSAY DESIGN设计的PCR引物对PIK3CA、PSCA和PTEN目标区域扩增,利用焦磷酸测序、Sanger测序法对位点进行检测。进一步验证了MassARRAY分子量阵列分析系统,同时发现焦磷酸测序能够对PIK3CA实现多位点突变的一次性检测。