鸡志贺氏菌病是由志贺氏菌(shigella.spp)引起的一种人畜(禽)共患传染病。该病流行广泛,发病率高,可引起不同品种、不同日龄的鸡发生痢疾,并可引起雏鸡死亡。该病的传播流行给我国养禽业造成了巨大的经济损失,同时也给人类公共卫生安全造成了严重隐患。所以,对鸡志贺氏菌病尽早做出准确诊断以便采取有效的预防和治疗措施成为控制本病的关键。因此,临床上建立一种切实可行的快速诊断方法越来越受到国内养禽业的关注。本研究以此为出发点,建立了诊断鸡志贺氏菌病的平板凝集试验和间接ELISA两种血清学方法,并对两种方法进行了临床应用,旨在为鸡志贺氏菌病的准确快速诊断提供特异性强、敏感性高和经济实用的诊断方法,为我国鸡志贺氏菌病的防控提供条件和技术支持。本课题以本实验室分离鉴定保存的鸡志贺氏菌为研究材料,开展了鸡志贺氏菌病平板凝集试验和间接ELISA两种血清学诊断方法的研究与应用工作。1.应用鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清,对平板凝集试验方法的各种反应条件进行选择和优化。结果显示：凝集反应抗原的最佳浓度为40亿/mL,最佳稀释液为0.5%的石炭酸生理盐水,最适pH为7.2,最佳反应温度为20℃～35℃,最佳反应时间为3～5min,确立了各项反应条件,建立了该病的平板凝集试验诊断方法。结果表明,该方法具有特异性强、准确快速、简便易行等优点。该血清学诊断方法的建立为鸡志贺氏菌病的快速诊断提供了重要条件,对有效控制该病提供了可靠依据。2.应用已建立的平板凝集试验诊断方法对采自河南省不同地区的810份鸡血清进行检测,结果显示鸡鲍氏型、痢疾型志贺氏菌血清抗体阳性率分别为31.5%和14.6%,表明鸡志贺氏菌病已在河南省部分地区广泛流行。应用结果显示,鸡志贺氏菌平板凝集试验诊断方法特异性强,重复性好,结果可靠,简便易行,对鸡志贺氏菌病的临床诊断具有很高的应用价值。3.以甲醛灭活的鸡志贺氏菌全菌体作为诊断抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功建立了诊断鸡志贺氏菌病的间接ELISA方法。通过对间接ELISA反应条件的一系列研究,确定了各组分的最适工作条件：所用酶标板的变异系数为4.19%,达到ELISA的要求；鸡志贺氏菌菌体抗原最适包被浓度为108cfu/mL,最适包被条件为4℃过夜；待检血清的最佳稀释度为1：160,与包被抗原在37℃作用1h；酶标二抗的最适工作浓度为1：4000,血清与酶标二抗的反应条件为37℃1.5h;最适封闭条件为2%明胶室温作用1.5h；底物最适反应条件为室温15min；阴阳性临界值为0.414。经特异性、敏感性和重复性试验,表明建立的间接ELISA方法具有很高的特异性、敏感性和重复性,适用于鸡群志贺氏菌感染抗体的诊断和检测。4.应用已建立的间接ELISA诊断方法对采自河南省不同地区的589份鸡血.清样品进行检测,检出阳性血清309份,阳性率达52.46%,比平板凝集试验方法的阳性检出率40.75%高11.71%。结果显示间接ELISA诊断方法具有特异性强、敏感性高和准确可靠等优点,可用于鸡志贺氏菌病的临床诊断和流行病学调查,具有很高的推广应用价值。