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由Colletotrichum gloeosporioides引起的炭疽病是杧果常见的重要病害。杧果生产实践中,对该病主要采用农业防治与化学防治。咪鲜胺(prochloraz)是常用的杧果炭疽病防治剂。本研究利用诱导获得的CYP51基因碱基突变的抗咪鲜胺C. gloeosporioides杧果菌株(MCGM2),研究其抗咪鲜胺C. gloeosporioides的分子机制;同时与携带不同功能基因的C. gloeosporioides杧果菌株:转GFP菌株(MCGG)、野生型菌株(MCGW)、敲除CYP51基因菌株(MCGD)进行生理学特性研究。以期探究抗咪鲜胺C. gloeosporioides菌株的特性,为治理C. gloeosporioides对咪鲜胺的抗药性提供理论基础。研究结果如下:使用SOE-PCR技术,利用同源替换的原理,用潮霉素基因替代CYP51基因,获得菌株MCGD。咪鲜胺对MCGD菌丝和分生孢子的敏感性高,其EC50分别为0.4606μg/1 nL和0.376μg/mL;咪鲜胺对MCGM2菌丝和分生孢子的EC5o为4.9844μg/mL和4.9703μg/mL;咪鲜胺对MCGW菌丝和分生孢子的EC50为0.1191μg/mL和0.6622μg/mL。咪鲜胺对MCGD与MCGM2的毒力(EC50)相差大于10倍。该结果表明,MCGD菌株与MCGM2菌株,对咪鲜胺的敏感性存在极显著差异。证实了MCGM2菌株突变的CYP51基因是导致C. gloeosporioides杧果菌株产生抗药性的直接原因从菌落形态来看,MCGW, MCGM2和MCGD皆有白色绒毛状气生菌丝;MCG W气生菌丝致密,菌落有明显的粉色色素沉淀;MCGD气生菌丝致密、但菌落粉色色素沉淀较少;MCGM2菌丝体稀薄,无粉色色素沉淀。MCGW菌株附着胞为深灰色圆形,MCGM2菌株附着胞为浅灰色圆形,MCGD菌株附着胞为浅灰色马蹄形,MCGG菌株附着胞为深灰色椭圆形,但颜色较MCGW浅。四菌株附着胞最大的是MCGW,最小的是MCGM2。在菌落增长速率方面,MCGD (0.843 cm/d) > MCGG (0.796 cm/d)> MCGW (0.689 cm/d) > MCGM2 (0.617 cm/d) 。从产孢量来看,MCGW (20.37×106个) >MCGG (17.6×106个) > MCGD (10.79×106个) > MCGM2(6.12x106个)。分生孢子的萌发率最高的是MCGM2为91%,MCGD为90.31%,MCGM2与MCGD两者差异不显著,孢子萌发率最低的是MCGW,仅为85.71%。在附着胞形成方面。形成率最高的是MCGW为97.93%,最低的是MCGM2仅为40.2%。在渗透压方面,携带不同功能基因的四种菌株,在高糖环境下和高盐环境下,生长表现没有明显差异。在高糖环境下表现不敏感,菌落直径皆高于对照;菌丝中的蛋白质含量随着环境中含糖量的升高而升高。在高盐条件下,四种菌株表现敏感,高盐环境抑制菌落生长,同时导致菌丝中蛋白质含量的减小。携带四种基因的菌株蛋白质含量大小为:MCGG (0.6721 mg/g)> MCGD (0.6712 mg/g)> MCGM2 (0.6189 mg/g)> MCGW (0.5222 mg/g)。转入荧光蛋白会增加菌丝中蛋白质的含量。在高盐渗透压条件下,测定了四种菌株菌丝中海藻糖含量,海藻糖含量,均有不同程度的升高,对高盐渗透压表现应激反应。突变的CYP51基因导致了菌株的生理学特性发生了变化,适应性和致病性降低。