【背景与目的】胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一,在我国居恶性肿瘤的发病率和死亡率之首,多数病例在确诊时已属中晚期,手术治疗的5年生存率仅为20%～30%,预后仍然不佳。近年来虽然出现了各种手术方式的改良及化疗、放疗方案的改进,但收效甚微。手术切除无法清除所有的肿瘤细胞,且存在术后复发和转移的弊端。化疗是胃癌除手术外非常重要的辅助治疗手段,但胃癌细胞对单用一种化疗药物的敏感性较差,且易出现耐药现象。同时,化疗作为临床上应用较多的抗肿瘤治疗方法,在杀伤肿瘤细胞的同时,对正常细胞也有较大的损伤,这在一定程度上限制了其疗效。而近年来作为恶性肿瘤第四种治疗模式的基因治疗研究得到了蓬勃发展,取得了一系列可喜的成果,有望成为手术、放疗和化疗的有效辅助疗法。在肿瘤发生过程中,原癌基因激活、抑癌基因失活、误配修复基因改变等起了重要作用。为了彻底征服癌症,人们一直在进行肿瘤基因的研究,这导致许多癌基因、抑癌基因、误配修复基因的发现,脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)就是其中之一。FHIT基因是1996年Ohta等人在研究某家族性肾细胞癌时利用外显子捕获的方法发现的,并克隆了相应的cDNA。因包含有主要的脆性位点FRA3B及从属于组氨酸三联体(histidine triad,HIT)蛋白超家族,故命名。FHIT基因自发现后即被拟定为一候选抑癌基因。虽然在早期有学者对它的抑癌作用提出质疑,但越来越多的研究表明,FHIT基因是一个抑癌基因。FHIT基因及其基因产物的抑癌机制目前研究的还不是很清楚,FHIT很可能从多条途径发挥肿瘤抑制作用。研究发现,FHIT基因在胃癌等与环境致癌因素关系密切的恶性肿瘤中表达缺失和异常率较高。有学者将FHIT基因导入肿瘤细胞并有效表达,可以使肿瘤细胞的一些恶性表型得以逆转,还可能诱导肿瘤细胞发生凋亡,从而达到治疗肿瘤或增强传统治疗方法的目的。还有学者将FHIT基因导入肺癌细胞株并有效表达,研究其对一些化疗药物敏感性的影响。化疗药物多西紫杉醇(docetaxel,DOC)作为一种微管稳定剂一直处于胃癌临床研究的领先地位,2期临床试验显示,单药多西紫杉醇一线或二线治疗晚期胃癌的有效率为17%—24%。基于对多西紫杉醇单药的较好活性和FHIT基因在胃癌的发生、发展和转归过程中作用的认识,本研究采用这两种因素干预FHIT基因表达缺失的人胃癌细胞株MGC-803,探讨外源性基因FHIT的表达对多西紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的影响,为胃癌的临床基因与化学药物的联合治疗提供理论基础,国内尚无报道。【方法】采用MTT法检测不同浓度(1.0、5.0、10、20、40μg/ml)及不同时间(24h、48h、72h)下多西紫杉醇对MGC-803细胞的抑制率并选择最佳浓度和作用时间;用脂质体将包含有外源性FHIT基因的重组真核表达质粒稳定转染胃癌细胞株(MGC-803);采用流式细胞术检测FHIT转染和DOC单独及联合作用后的细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测干预前后cleaved-Caspase3的蛋白表达【结果】1.获得稳定表达FHIT基因的胃癌细胞。2.DOC对胃癌细胞具有抑制作用,且浓度为20μg/ml、时间为48h时最明显。3.DOC+pRcCMV-FHIT组细胞的凋亡水平(65.54%)较阴性对照组(3.27%)、pRcCMV组(3.55%)、pRcCMV-FHIT组(13.94%)、DOC组(44.13%)、DOC+pRcCMV(45.29%)组明显增高,且差异具有统计学意义(P＜0.05);4.DOC+pRcCMV-FHIT组细胞的cleaved-Caspase3蛋白表达较其它各组明显增强。【结论】FHIT基因表达与DOC能够协同促进胃癌细胞的凋亡,这可能与二者能够协同上调Casepase-3蛋白表达相关。