多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上检测BDV-P24蛋白质的应用

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研究目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。研究方法:选择出生24h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠20只在相同部位注射磷酸盐缓冲液(Phosphate BufferedSaline,PBS),未经注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作为阴性实验对照,饲养到60天取脑石蜡包埋制片;免疫组化染色用Envision两步法,一抗为多克隆或单克隆P24抗体,以PBS代替一抗作为空白对照,P24抗体的稀释浓度分别从1:50、1:100、1:200、1:400、直到1:5000;以高倍镜下神经细胞细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性,将每张切片阳性细胞比例评分乘以阳性强度评分计算总分。结果:多克隆P24和单克隆P24抗体分别在BDV感染大鼠实验组与阴性对照组的染色评分差异有统计学意义(多克隆抗体Z=-3.108,P=0.000,而单克隆抗体Z=-4.605,p=0.000);在多克隆P24抗体稀释度中,1:200、1:400的敏感性好而背景着色较轻,在单克隆P24抗体稀释度中,1:100、1:200、1:400的敏感性好而无背景着色。结论:多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上能检测出BDV P24蛋白质;并且多克隆P24抗体推荐的浓度为1:200和1:400,单克隆P24抗体的推荐浓度为1:100、1:200和1:400。
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