论文部分内容阅读
目的通过对比肝阳上亢证高血压患者、非肝阳上亢证高血压患者及正常人血清中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达谱的不同,明确高血压病肝阳上亢证与miRNA之间是否存在相关性,探索高血压肝阳上亢证患者血清中是否存在特异性表达的一个miRNA或几个miRNAs。方法1.在本院体检中心及心内科门诊收集初发高血压病或非初发但是未服用降压药的高血压患者及健康体检者的空腹血清,将所收集的病例分为三组,分别是肝阳上亢组、非肝阳上亢组、健康组。2.分别抽取肘静脉血5m1,存于无抗凝的干燥试管,3000r/min离心10分钟,抽取血清,-30℃冻存。采用Trizol LS法提取血清中RNA,按照miRNeasy Mini Kit操作手册,使用吸附柱进行RNA的富集。3.利用Solexa测序方法对以上3组样本进行基因测序分析,检测出肝阳上亢组与非肝阳上亢组、肝阳上亢组与正常人群组、非肝阳上亢组与正常组之间差异表达的基因。4.利用miRNA在线预测软件miRWalk2.0整合肝阳上亢组与非肝阳上亢组、肝阳上亢组与正常人群组中共有的差异表达miRNA,筛选出可能与肝阳上亢证相关的miRNAs。5.使用实时荧光定量PCR检测筛选出的miRNAs在各组的表达量,包括其浓度及总量。结果发现肝阳上亢组与正常组的miRNA的表达量均存在明显差异(P<0.01)；肝阳上亢组与非肝阳上亢组比较miRNA的表达量也存在明显差异(P<0.01)；非肝阳上亢组与正常组比较miRNA的表达量无差异(P=0.26,P>0.05)。肝阳上亢组与非肝阳上亢组miRNA的浓度比较存在明显差异(P<0.01)；肝阳上亢组与正常组miRNA的浓度比较也存在明显差异(P<0.01)；非肝阳上亢组与正常组miRNA的浓度比较无明显差异,(P=0.15,P>0.05)。肝阳上亢组与正常组：共检测到miRNA1037个,其中差异表达的miRNA有653个(P<0.05),表达下调的miRNA223个,表达上调的miRNA430个；非肝阳上亢组与正常组：共检测到miRNA963个,其中差异表达的miRNA有573个,表达下调的miRNA256个,表达上调的miRNA317个；肝阳上亢组与非肝阳上亢组：共检测到miRNA957个,其中差异表达的miRNA有720个,表达下调的miRNA277个,表达上调的miRNA433个。结果在高表达的基因群中发现miR-126。荧光定量结果显示肝阳上亢组miR-126的表达显著高于非肝阳上亢组与正常组(P<0.01)。结论高血压肝阳上亢证形成与miRNAs有关,miR-126可能是高血压肝阳上亢证形成的特异性miRNAs之一。