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背景和目的中国是世界上食管癌发病率及死亡率最高的国家之一,据国家癌症中心研究报告显示,目前我国食管癌的发病率和死亡率分别位居各类恶性肿瘤的第3位和第4位,严重威胁着我国居民的健康水平。食管癌的组织学类型主要分为鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)和腺癌(adenocarcinoma,AC),我国食管癌病理类型以鳞状细胞癌为主,占全部食管癌病例90%~93%。Cell cycle-related and expression-elevated protein in tumor(CREPT)是一个新发现的致癌基因,具有参与并调控细胞RNA转录、DNA复制与损伤修复以及蛋白质翻译和代谢等方面的功能。研究显示,CREPT在多种人类恶性肿瘤中高表达,其中包括胃癌、乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等,并且与肿瘤的进展及预后密切相关。目前研究认为,CREPT的致癌机制可能与促进Cyclin D1的转录相关,进而影响细胞周期进程,并参与肿瘤细胞的增殖和转化过程。但迄今为止有关CREPT在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的研究尚未见报道。因此,本研究旨在探究CREPT在食管鳞状细胞癌肿瘤组织及其匹配的正常组织中的表达情况,并分析其与Cyclin D1的相关关系,初步探讨CREPT在食管鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用机制及临床意义,为开发食管鳞状细胞癌治疗可能的新靶点提供一定的实验及理论依据。方法收集40例2017年6月至2018年9月期间于广西医科大学附属肿瘤医院胸外科行食管癌根治术切除的新鲜食管鳞状细胞癌组织及正常组织(距瘤体5cm以外),采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot,WB)方法检测其CREPT和Cyclin D1的mRNA及蛋白表达水平;另收集2014-2018年间保存于广西医科大学附属肿瘤医院病理科的食管鳞状细胞癌组织及正常组织蜡块标本74例,通过免疫组化方法(IHC)检测CREPT和Cyclin D1表达情况,结合临床资料进一步探讨两者与食管鳞状细胞癌患者临床病理学特征及预后的关系,并采用Spearman相关性分析法分析CREPT与Cyclin D1的相关性。结果1.荧光定量RT-PCR检测结果显示:CREPT mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的相对表达水平是正常组织的4.13±3.94倍,其在两组中的表达差异有统计学意义(t=5.023,P<0.01);Cyclin D1 mRNA在癌组织中的相对表达水平是正常组织中的2.69±2.54倍,其在两组中的表达差异有统计学意义(t=4.220,P<0.01)。Western Blot蛋白水平检测显示:食管鳞状细胞癌组织中CREPT和Cyclin D1蛋白的表达水平均明显高于其配对的正常组织,差异均有显著统计学意义(P均<0.05)。2.免疫组化染色结果进一步证实了CREPT和Cyclin D1在食管鳞状细胞癌组织及其配对正常组织中的表达存在差异,结果显示:CREPT蛋白主要定位于细胞核与细胞质中,呈棕黄色颗粒,其在食管鳞状细胞癌组织中的总体阳性表达率为93.2%(69/74),而在正常组织总体阳性表达率为仅41.9%(31/74),其中在食管鳞状细胞癌组织中CREPT蛋白阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达率分别为6.8%(5/74)、20.3%(15/74)、31.1%(23/74)和41.9%(31/74),正常组织中CREPT蛋白阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达率依次为58.1%(43/74)、13.5%(10/74)、18.9%(14/74)和9.5%(7/74),两组差异具有统计学意义(Z=-6.610,P<0.001);Cyclin D1蛋白主要定位于细胞核中,呈棕褐色颗粒,在两组组织中Cyclin D1蛋白总阳性表达率分别为78.4%(58/74)和16.2%(12/74),其中,在食管鳞状细胞癌组织中Cyclin D1蛋白阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性表达率分别为21.6%(16/74)、29.7%(22/74)、18.9%(14/74)和29.7%(22/74),正常组织中Cyclin D1蛋白阴性、弱阳性和中等阳性表达率依次为83.8%(62/74)、12.2%(9/74)和4.1%(3/74),两组差异具有统计学意义(Z=-6.390,P<0.001);3.在74例食管鳞状细胞癌组织中,CREPT蛋白的表达水平与患者年龄(Z=-1.050,P>0.05)、性别(Z=-0.358,P>0.05)、吸烟(Z=-1.227,P>0.05)、饮酒(Z=-1.076,P>0.05)、肿瘤位置(χ~2=1.531,P>0.05)以及有无淋巴结转移(Z=-1.789,P>0.05)无明显相关性,而与TNM分期(Z=-2.002,P<0.05)及病理分级(χ~2=12.858,P<0.01)呈显著相关,并随着临床分期的进展和病理分化程度的越差,其阳性率及阳性程度越高;Cyclin D1蛋白的表达在肿瘤TNM分期(Z=-3.747,P<0.01)及淋巴结转移与否(Z=-3.258,P<0.01)间具有显著性差异;Cox多因素回归分析显示,TNM分期为影响食管鳞状细胞癌患者总生存率的独立预后危险因素(P<0.05);CREPT阳性表达与食管鳞状细胞癌患者生存预后无明显相关性(P>0.05)。4.经Spearman相关分析显示,CREPT与Cyclin D1蛋白表达水平在食管鳞状细胞癌肿瘤组织中存在一定的相关性,呈正相关关系(r=0.324,P<0.01)。结论1.无论在mRNA水平或蛋白表达水平上,食管鳞状细胞癌组织中CREPT和Cyclin D1的表达量均显著高于其配对正常组织,推测CREPT和Cyclin D1在食管鳞癌肿瘤的发生、发展过程中可能起着重要的促进作用;CREPT的研究有望为食管鳞癌的治疗提供新的思路;2.食管鳞状细胞癌组织中CREPT蛋白的表达水平与TNM分期及病理分级有关,且随着临床分期的进展和病理分化程度的越差,其阳性率及阳性程度越高,提示CREPT蛋白的表达水平可能可作为食管鳞癌早期诊断和恶性程度判断的一个新的参考指标;3.在食管鳞状细胞癌组织中,CREPT表达与Cyclin D1蛋白表达之间存在一定的相关性,呈正相关关系,其异常表达可能是通过促进Cyclin D1的转录使细胞周期加速并刺激细胞增殖,从而参与食管鳞状细胞癌的生长和转化过程。