论文部分内容阅读
肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)在调节血压、体液和电解质平衡及心血管疾病发生中发挥重要作用。RAS系统基因是原发性高血压重要侯选基因。用DNA的多态性（包括SNPs，STR等）与疾病的连锁不平衡(linkage disequilibrium，LD)分析鉴定高血压、糖尿病等复杂疾病的易感位点正受到越来越多的重视。我们对RAS系统的血管紧张素原基因（angiotensinogen，AGT） 和血管紧张素转换酶基因（angiotensin-converting enzyme，ACE）的15个多态位点用PCR-RFLP、和最大期望值（expectation maximization，EM）算法为基础的最大似然法(maximum likelihood estimate，MLE)，对701例的样本进行了连锁不平衡状态、单倍型结构估计，同时对病例-对照样本进行了高血压病关联分析。现将结果报告如下：<WP=4>第一部分：血管紧张素原基因与原发性高血压选取AGT基因启动子区 -217, -152, -20, -6, 内含子1 的+31, 第二外显子3889（T174M）和 4072（T235M） 共7个位点，对497的样本（高血压患者298例，血压正常对照199例）进行了分析，结果发现：1. 大部分位点存在连锁不平衡。A-6G，C+31T，C4072T三位点两两存在完全连锁不平衡(D’=1)；A-217G和G-152A位点，G-152A和3889T位点平衡传递；其余配对位点为强的连锁不平衡。2. 本群体存在7种单倍型，并被A-6G，C+31T，C4072T分为两大类。3种最常见的单倍型为H1(-217: A, -152: G, -20: A, -6: A, +31: C, 3889: C; 4072: C), H2(-217: A, -152: G, -20: A, -6: G, +31: T, 3889: C; 4072: T)，H3(-217: G, -152: G, -20: A, -6: A, +31: C, 3889: C; 4072: C)。3. 病例对照研究发现单倍型H7(-217: G, -152: G, -20: A, -6: G, +31: T, 3889: C: 4072: T)仅存在于对照中；单个位点分析未见与高血压关联。4. 最大俭约法分析显示，含有G-6/T+31/T4072的单倍型被-217位点分为 H7(-217: G, -152: G, -20: A, -6: G, +31: T, 3889: C: 4072: T)和H2 (-217: A, -152: G, -20: A, -6: G, +31: T, 3889: C: 4072: T) 两种单倍型，H7在G-217A位点是G并可能与血压控制的保护性因素连锁不平衡。<WP=5>第二部分：血管紧张素转换酶基因多态性与血浆酶活性及原发性高血压紫外法检测了204例健康个体血清ACE活性，同时检测上述健康个体和前述高血压病例-对照样本ACE基因启动子区A-5466C，T-3892C，A-240T，编码区T1237C，G2215A，G2350A 6个SNP位点，以及第16内含子的Alu片段插入/缺失（I/D）多态和3’端4656（CT）2/3多态性，发现：1. ACE基因存在高度连锁不平衡（P＜10-4），上述8个多态性存在于常见的9个单倍体中，其中3种最常见的单倍型为A(A-T-A-T-G-I- A-3), B(C-C-T-C-A-D-G-2)和C(A-T-A-C-A-D-G-2)，A和B在每个位点都不相同。最大简约法分析提示本群体可被分为3个进化枝，C枝最有可能由单倍型A和单倍型B产生。2. ACE基因各位点多态性在个体中的分布与血浆中ACE活性在有关，组成单倍体A的各等位位点与血浆中ACE低活性有关，单倍体B的各等位位点与血浆中ACE高活性有关。3. 病例对照研究发现单个位点除A-240T外，其余各位点均未见与高血压关联，单倍型D的频率在高血压患者中高于对照组，由ACE低活性位点组成单倍型B的频率在患者中有升高的趋势（P=0.097）。小结对701例高血压患者和对照个体15种多态位点检测发现，在AGT和ACE基因区域内，用7-9个常见的单倍型可解释其大部分多态。AGT基因中H7单倍型在正常血压个体中的频率高于高血<WP=6>压组，可能与控制血压的保护性因素连锁不平衡。ACE基因中单倍型B在高血压患者中的频率高于对照组（P=0.097），且组成该单倍型的位点均为升高ACE血浆酶活性位点，因而可能与高血压易感位点连锁不平衡。此外，本研究结果支持基因剂量效应可能存在于单倍型中，而不与单个位点直接关联。