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本实验通过对外用甲氨喋呤(Methotrexate，MTX)柔性纳米脂质体透皮吸收效果和对RA大鼠血清γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)和白细胞介素-4(interleukin-4，IL-4)影响的研究，拟寻找一种治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方便、见效快而毒副作用小的MTX新剂型。
文中采用了2种方法。1．透皮扩散实验：采用陈鹰等人的方法<[1]>，制备离体鼠皮，将其装于Franz扩散池，角质层面向供给室，真皮层面向接受池，接受液为生理盐水30ml，恒温水浴(37+1)℃，磁力搅拌器转速为100转/分钟。分别将0.5﹪甲氨喋呤散剂、0.25﹪和0.5﹪甲氨喋呤柔性纳米脂质体均匀涂布于各角质层表面，分别于2、4、6、8、10、12h于接受池取样5ml(同时补充同温度生理盐水5m1)，用0.45μn微孔滤膜过滤。滤液用生理盐水稀释至10ml，于306nm处测定吸光度，扣除生理盐水组后的吸光度代入标准曲线，再利用公式计算12h累积透过量和12h累积透过率。2．IFN-γ和IL-4水平测定：85只健康SD大鼠随机取10只设为正常组，余下的75只按照邓安梅等人方法<[2]>造RA大鼠模型-Ⅱ型胶原诱导关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis，CIA)模型，它是目前国际公认的研究人类RA的模型，在临床、免疫病理反应等方面均极为相似。剔除5只造模不成功的，余下的70只大鼠随机分为4组：模型组(n=10)，0.5﹪MTXt(n=20)；0.25﹪MTX脂质体组(n=20)，0.5﹪MTX脂质体组(n=20)。正常组大鼠不予处理，其余各组于初次免疫7d后给药，于大鼠右后足分别涂抹蒸馏水、0.5﹪甲氨喋呤散剂、0．25﹪和O．5﹪甲氨喋呤柔性纳米脂质体，约2.0～4.0g/只(视关节大小而定)，每周一次。采用关节炎指数积分法评定关节症状，关节指数积分越高，关节症状越严重。给药后第45天采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清IFN-γ和IL-4水平。研究结果如下：
1.各组大鼠透皮吸收量比较：0.25﹪和0.5﹪MTX脂质体组12h累积透过量、12h累积透过率均高于0.5﹪MTX组外敷剂组，差异有显著性意义(均P<0.01)；0.25和0.5﹪MTX脂质体组累积透过量与12h累积透过率差异无显著性意义(P>0.05)。
2.各组大鼠关节炎指数比较各组大鼠关节炎指数积分21d前无明显区别，模型组随着时间延长，关节炎指数积分增加；0.5﹪MTX组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组于25d达高峰，但仍低于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组在25天、30天、35天、40天、45天发病程度明显轻于模型组(均P<0.05)。
3.各组大鼠血清IFN-γ表达水平比较模型组、0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显高于正常组(均P<0.01)。0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显低于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IFN-γ水平明显低于0.5﹪MTX散剂组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组IFN-3,水平与0.5﹪MTX脂质体组相比，无显著差异(P>0.05)。
4.各组大鼠血清IL-4表达水平比较模型组、0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显低于正常组(均P<0.01)。 0.5﹪MTX散剂组、0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显高于模型组(均P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组和0.5﹪MTX脂质体组IL-4水平明显高于0.5﹪MTX散剂组(P<0.01)。0.25﹪MTX脂质体组IL-4水平与0.5﹪MTX脂质体组相比，无显著差异(P>0.05)。
研究结论：外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能有效渗透皮肤组织；外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能明显降低RA大鼠关节炎指数；外用甲氨喋呤柔性纳米脂质体能下调大鼠血清IFN-γ水平及上调大鼠血清IL-4水平，且其作用明显优于普通外用甲氨喋呤制剂。