褐藻酸寡糖具有很强的促进动、植物生长作用,同时还具有其他多种生理活性,是一种极具开发潜力的功能性寡聚糖醛酸。本文主要从以下几个方面对酶解褐藻酸钠制备褐藻酸寡糖进行了研究。采用Dowex1×8强碱型阴离子交换树脂对褐藻酸钠水解液进行分离,乙酸水溶液梯度洗脱,可以成功地从褐藻酸钠硫酸水解液中分离纯化出L-古洛糖醛酸和D-甘露糖醛酸,两组分经HPLC检测纯度分别达到99%以上;将其作为标准品采用HPLC检测,褐藻酸钠和海带中的L-古洛糖醛酸及D-甘露糖醛酸的含量分别为11.48%和63.06%以及4.67%和21.65%。采用中科院大连化物所酶解制得褐藻酸寡糖作为样品,对三种常用的寡聚糖醛酸检测方法进行比较:TLC,HPLC和FACE,结果显示三种方法均能对褐藻酸寡糖进行分离检测。选定本实验用检测褐藻酸寡糖的方法主要为TLC和HPLC,其中TLC展开剂为正丁醇︰甲酸︰水(4︰6︰1,v/v/v),上行展开2次;HPLC方法如下色谱系统:Waters 2695;检测器:Waters PAD紫外检测器;色谱柱:TSK-GEL DEAE-2SW 4.6mm×250mm(Tosoh Corp. ,Tokyo,Japan);流动相:重蒸水-0.25MNaCl在60min内梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测温度:室温;检测时间:60min。对紫色链霉菌IFO15732进行产酶发酵培养,得到粗酶液,采用DNS法测得酶活力在培养第八天达到最高,为88.00U/mL;酶蛋白的主要分子量为23,000Da和27,000Da。采用上述酶降解褐藻酸钠得到的产物用TLC检测得知含有单糖醛酸,用ESI-TOF-MS检测得知含有二糖至八糖的混合褐藻酸寡糖。说明该粗酶液具有褐藻酸裂解酶活力,作用于褐藻酸钠后得到的产物主要为单糖醛酸和聚合度为2-8的混合褐藻酸寡糖。