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目的:Shh与Nkxs基因家族与脑发育密切相关,分析甲减母鼠在孕20天时胎鼠脑发育过程中Shh信号通路对Nkx2.2和Nkx6.2在基因和蛋白水平的表达影响,进一步明确甲减状态下Nkxs影响脑发育的作用机制,并检测大脑皮质皮层在早期脑发育中对甲状腺激素的依赖性。此外,筛选在甲减模型中可以不受处理因素影响稳定表达的管家基因作为内参。方法:建立甲减大鼠模型,用低碘饲料和KClO3水溶液进行喂养,正常组用KIO3水溶液补偿碘摄入;三个月后,设置正常组、正常抑制组、甲减组、甲减治疗组、甲减治疗抑制组、甲减激活组,按2μg/100g/d L-T4治疗,通路抑制组按1mg/100g/d腹腔注射Cyclopamine,通路激活组按0.3mg/100g/d腹腔注射Purmorpamine。利用荧光定量PCR法和Western blot法检测各组胎鼠脑组织中Gli-1、Nkx2.2、Nkx6.2的mRNA相对表达量和蛋白表达水平,用HE染色法观察脑皮层分层生长情况和神经元细胞迁移情况。体外培养大鼠星形胶质细胞,按12h、24h、48h分为高激素水平、正常激素水平和低激素水平,观察体外条件下甲状腺激素对Shh、Nkx2.2和Nkx6.2的表达影响。结果:1.内参基因UBC可以在甲减模型中稳定表达;2.本次体内实验大鼠妊娠期对DMSO的最大耐受量为1ml/100g/d;1mg/100g/d Cyclopamine注射量可抑制Shh信号通路;0.3mg/100g/d Pumorpamine注射量可激活Shh信号通路;3.正常激素水平下,抑制Shh信号通路后,Nkx2.2和Nkx6.2的表达水平会下降;4.TH水平低水正常水平时,Gli-1、Nkx2.2和Nkx6.2的表达会下降;5.Shh在早期脑发育中对TH很敏感,当TH水平低时,外源性补充通路调控剂来特异性激活Shh通路后,会提高Gli-1表达水平,但对Nkx2.2和Nkx6.2的表达没有影响;通过注射左旋甲状腺素恢复TH水平后,Gli-1、Nkx2.2和Nkx6.2表达与正常组无差异;当恢复后抑制Shh信号通路后,Gli-1表达水平明显低于正常组,但Nkx2.2和Nkx6.2的表达与甲减时无差异;6.1ml/100g/d DMSO对早期脑发育胎鼠的三种基因的表达水平均没有影响;7.体外培养星形胶质细胞在12h、24h和48h时,低激素组Shh表达水平均明显低于正常组,高激素组与正常组相比,12h时表达无差异,24h和48h时Shh表达量均高于正常组,且在48h表达最多;8.Nkx2.2在正常组中12h时表达量最高,48h时表达量最低;在低激素组中,12h时表达量最高,之后表达水平未见差异;激素水平正常时,Nkx6.2表达水平未见波动;在低激素组中,12h和24h明显低于正常组;在高激素组中,12h和24h表达量高于正常组,48h低于正常组;说明TH可以在细胞水平明显影响Shh和Nkx2.2、Nkx6.2的表达;9.Shh通路和TH水平正相关影响皮层分化。结论:甲减大鼠的Shh信号通路与Nkx2.2和Nkx6.2的表达具有相关性。