急性臭氧暴露致大鼠肺毒性及早期生物标志物的研究

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目的:探讨臭氧急性暴露对雄性和雌性wistar大鼠的肺毒性,毒性效应的性别差异及敏感性指标。方法:120只wistar雄性和雌性大鼠随机分成对照组(过滤空气暴露)、臭氧暴露组(0.12ppm、0.5ppm、1.0ppm、2.0ppm、4.0ppm),每组20 只,雌雄各半,动态染毒6h。提取肺泡灌洗液(BALF)、血液、尿液及肺组织,微量法检测SOD活性、MDA及GSH含量,ELISA法检测IL-6、TNF-α、IL-1β及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),彗星实验、微核试验和DNA-蛋白质交联实验分析DNA和染色体损伤,HE染色分析肺组织结构变化。结果:对于雄性大鼠而言,与对照组相比,血液和BALF中的N计数分别在较低浓度0.12ppm和0.5ppm起有显著性增加,而BALF和血液中的WBC及血液中的Mon计数在较高浓度1.0ppm,BALF中的L、Mon计数均在4.0ppm时有显著性差异。BALF和肺组织中的TNF-α及肺组织和血液中的IL-1β均在0.12ppm时有显著性改变,BALF中的IL-1β和肺组织中的IL-6均在0.5ppm时有显著性差异。对于氧化损伤,肺组织中的MDA的含量在0.5ppm起有显著性差异,肺组织中的GSH和血液中的MDA含量均在1.0ppm起有显著性改变,而血液中的GSH在4.0ppm时有显著性改变。对于肺结构损伤指标,BALF中的TP在0.12ppm起有显著性增加,LDH在1.0ppm起有显著性改变,而AKP和ALB的水平均在2.0ppm时有显著性增加。对于遗传毒性,BALF和血液中8-OHdG含量在0.12ppm,肺组织、尿液及淋巴细胞中的8-OHdG含量均在1.0ppm起有显著性增加。肺组织细胞及淋巴细胞彗星的拖尾长度和拖尾率均在0.12ppm起有显著性改变。对于雌性大鼠而言,与对照组相比,BALF中N计数在0.5ppm起,BALF和血液中的WBC计数在1.0ppm起,BALF中的L、Mon计数在4.0ppm时有显著性差异。BALF中的TNF-α、肺组织中的IL-1β和血液中的IL-6的含量均在0.12ppm起有显著性改变,肺组织中的TNF-α含量在0.5ppm,BALF中的IL-1β和肺组织的IL-6均在2.0ppm起有显著性改变。对于氧化损伤指标,肺组织中的GSH和MDA的含量均在1.0ppm起,血液中的GSH含量在4.0ppm时有显著性改变。对于肺组织结构损伤指标,BALF中的LDH和TP的含量均在1.0ppm起有显著性改变,AKP和ALB的含量在更高浓度2.0ppm起有显著性改变。对于遗传毒性损伤,只有肺组织中的8-OHdG的水平在较低的浓度0.5ppm时有显著性增加,而BALF、血液、尿液及淋巴细胞的水平在较高浓度4.0ppm时才有显著性变化。结论:较高浓度臭氧急性染毒对雄性和雌性大鼠均有明显的肺毒性,而在低浓度和/或中浓度臭氧暴露时两种性别大鼠表现出不同的毒性效应。与雄性相比,雌性大鼠吸入相同浓度的臭氧后肺组织病理变化更严重。急性臭氧暴露后,雌性大鼠血液中IL-6和8-OHdG,雄性大鼠BALF中总蛋白(TP)和8-OHdG、肺组织中TNF-α和SOD、以及血液中IL-1β可能是肺毒性的敏感监测指标。
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