论文部分内容阅读
本文以表面展示人源蛋白酶体α亚基6(Human Proteasome subunit alpha 6，HPSa6)的重组酵母细胞MT8-1-a6和抗原蛋白HPSa6免疫小鼠制备的单克隆抗体3D7D12D4为研究对象，将酵母表面展示抗原技术与酶联免疫吸附检测技术(ELISA)和凝集检测技术(Agglutination)结合，研究酵母表面展示抗原检测抗体的新方法，为单克隆抗体的快速筛选提供基础，也为酿酒酵母表面展示系统的应用提供新的思路。
主要研究内容包括，免疫荧光检测技术(FCM)检测重组酵母细胞MT8-1-α6表面展示抗原的表达；酵母表面展示.酶联免疫吸附测定技术(yeast-ELISA)的建立；酵母表面展示.凝集试验检测技术(yeast-agglutination)的研究；以及针对酵母表面展示的三种检测技术(FCM、yeast-ELISA和yeast-agglutination)的评价。
主要实验结果如下：
①重组酵母细胞MT8-1-α6成功表面展示出抗原HSPα6。
②成功建立酵母表面展示.酶联免疫吸附测定技术(yeast-ELISA)，yeast-ELISA检测技术的最佳酵母细胞工作浓度是0.50 OD<,600>，羊抗小鼠IgG-HRP的最佳工作稀释度是1：5000，检测单克隆抗体，有良好的重现性和特异性，测得效价(1：5×10<5>左右)与抗原蛋白HPSα6包被间接ELISA检测技术有良好的相关性。
③酵母表面展示.凝集试验检测技术得到初步检验。
研究结果表明，酵母表面展示-酶联免疫吸附测定技术可应用于单克隆抗体及抗血清的检测，而且容易实现高通量的抗体筛选；酵母表面展示.凝集试验检测技术并未获得成功的应用；三种检测方法相比较，FCM技术最为灵敏，yeast-ELISA对于较高效价的抗体也同样具有较高灵敏度，而yeast-agglutination的灵敏度较低。