【摘 要】
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目的：构建Tat蛋白转导结构域（Tat-Protein Transduction Domain, Tat-PTD）与人金属硫蛋白（Metallothionein, MT）的融合基因的重组工程菌株,经诱导可溶性表达重组蛋白TAT-MT,分离纯化和鉴定目的蛋白,并检测其对金属离子的螯合能力。方法：设计特异引物,用PCR方法扩增得到编码TAT-PTD和MT融合蛋白的DNA片段,将该片段与表达载体pET3
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目的：构建Tat蛋白转导结构域（Tat-Protein Transduction Domain, Tat-PTD）与人金属硫蛋白（Metallothionein, MT）的融合基因的重组工程菌株,经诱导可溶性表达重组蛋白TAT-MT,分离纯化和鉴定目的蛋白,并检测其对金属离子的螯合能力。方法：设计特异引物,用PCR方法扩增得到编码TAT-PTD和MT融合蛋白的DNA片段,将该片段与表达载体pET3c连接,得到重组质粒pET3c-Tat-MT,并转化到大肠杆菌BL21 （DE3） PlySs中,SDS-PAGE筛选重组表达菌株。通过探讨温度、碳源、氮源等因素对融合蛋白TAT-MT表达的影响,优化工程菌的表达条件。采用Ni-NTA Resin纯化目的蛋白TAT-MT,原子吸收光谱测定工程菌对金属离子的螯合能力。结果：将编码TAT-MT融合蛋白的DNA片段克隆到原核表达载体pET-3c中,并转化大肠杆菌BL21 （DE3） plySs,经筛选获得阳性重组子。1mM IPTG 20℃诱导20h后,获得表观分子量约为15kd的目的蛋白。在重组蛋白小试发酵实验中（5L）,重组菌湿菌重可达30g/L,重组蛋白表达量占菌体总蛋白18%。离心收集菌体后,超声破碎,取其上清利用Ni-NAT Resin组氨酸亲和层析柱进行纯化,获得目的蛋白TAT-MT,凝胶扫描结果显示其纯度为85%。原子吸收光谱测定结果显示,重组工程菌对镉和铜离子的螯合能力与对照菌株相比分别提高2.5倍和1.27倍,重金属螯合活性存在显著性差异（p<0.05）。结论：融合蛋白TAT-MT在重组工程菌中获得高效表达,含重组质粒的工程菌具有螯合金属离子的能力。
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