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WRKY转录因子是植物所特有的转录家族,参与植物生长发育、衰老、生物胁迫、非生物胁迫以及次生代谢的过程。本研究以慈竹笋RNA转录组数据为基础,结合其他植物已知WRKY序列信息,设计特异引物,克隆到两条WRKY序列,并对其进行了生物信息学分析、胁迫诱导表达以及遗传转化,为通过基因手段改良慈竹品种奠定了基础。主要研究结果如下:1.在慈竹笋转录组数据基础上,从慈竹中克隆了两条WRKY,分别命名Be WRKY1和Be WRKY2,Gen Bank注册号为KJ462124和KJ 4 6 2 12 5。2.生物信息学分析结果表明,Be WRKY 1和Be WRKY 2基因全长序列分别为570bp和888bp,分别编码189个和295个氨基酸残基。Be WRKY 1编码的蛋白呈酸性,而Be WRKY 2编码的蛋白呈碱性。两者编码的蛋白二级结构含有丰富的无规则卷曲,较多的α-螺旋、延伸链,较少的β-转角。预测Be WRKY1编码的蛋白三级结构含有8个β-折叠,7个β-转角;预测Be WRKY 2编码的蛋白质三级结构含有6个β-折叠,9个β-转角,两者结构存在一定的差别。两个基因编码的蛋白均含有WRKY superfamily保守结构域。Be WRKY1和P h e WRKY 1亲缘关系最近,Be WRKY 2和Ta WRKY 1 6亲缘关系最近。两者编码的蛋白亚细胞定位在细胞核,蛋白既没有跨膜运动也没有肽信号区域。3.Be WRKY 1和Be WRKY 2基因的组织表达模式分析结果显示:Be WRKY 1相对表达量依次为茎>笋>未展开叶>完全展开叶,茎中的相对表达量远远高于其它部位。而Be WRKY2的相对表达量为完全展开叶>茎>未展开叶>笋,展开叶的相对表达量最丰富。4.对慈竹幼苗进行ABA(200μmol/L)、N a C l(2 00 m m ol/L)、P E G-6 00 0(2 0%)胁迫处理,通过R e a l-t i m e P C R技术对Be WRKY 1和Be WRKY 2基因进行胁迫诱导差异性表达分析。结果表明,200μmol/L N a C l和2 0%P E G-60 0 0胁迫处理激活了Be WRKY 1表达,却减少了Be WRKY 2的转录积累;Be WRKY 1可能短时间内迅速参与逆境响应,Be WRKY 2对干旱和ABA胁迫伤害更为敏感,而可能不参与高盐类胁迫保护反应。5.构建了Be WRKY 1和Be WRKY 2的植物过表达载体和R N Ai表达载体,分别为p CAMBIA-Be WRKY1、p CAMBIA-Be WRKY2、p C A M B IA–Be WRKY 1-R N A i和p C A M B IA–Be WRKY 2-R N A i并将过表达载体成功转化烟草,得到大量转基因烟草植株。