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纳他霉素是一种对酵母菌、霉菌等真菌具广谱抗性的多烯大环内酯类抗生素,作为新型生物防腐剂广泛应用于食品、医疗等领域。由于纳他霉素的发酵水平较低,生产成本较高,广泛应用受到限制。因此利用基因工程技术提高纳他霉素发酵水平,具有重要意义。论文通过Southern杂交、引物步移测序等方法在恰塔努加链霉菌基因组文库的柯斯质粒pMRD46上克隆到了纳他霉素生物合成基因簇附近的一个基因scnRⅠ,FramePlot分析及序列同源性比较表明scnRⅠ是纳他霉素潜在的途径特异性正调控基因。scnRⅡ是本实验室已克隆到的另一纳他霉素途径特异性正调控基因,分别将含途径特异性正调控基因的DNA片段scnRⅠ+Np(自身启动子)、scnRⅡ+ermE~*P、scnRⅠ+scnRⅡ+Np(自身启动子)与链霉菌整合表达载体pIJ8630连接,成功构建了重组质粒pLY2、pLY4、pLY5。通过大肠杆菌-链霉菌结合转移方法,将重组质粒pLY2、pLY4、pLY5转至出发菌株恰塔努加链霉菌L10中,构建了多拷贝基因工程菌株恰塔努加链霉菌ZJUC1、ZJUC2、ZJUC3。基因工程菌株和出发菌株分别在YEME(不加蔗糖)和YSG发酵培养基中进行摇瓶发酵和正交优化,结果表明:ZJUC1、ZJUC2、ZJUC3在YEME培养基中的纳他霉素发酵单位分别为1.96g/L、1.91g/L、2.12g/L,分别比出发菌株提高了17%、14%、27%;YSG培养基中,ZJUC3的纳他霉素发酵单位为3.76g/L,比出发菌株提高了33%;YSG培养基的正交优化结果表明,葡萄糖和黄豆饼粉对纳他霉素产量有显著影响,其较优组成为葡萄糖60g/L、黄豆饼粉27 g/L、酵母粉6.5 g/L、pH8,优化后ZJUC3的纳他霉素发酵单位达到4.14 g/L,比出发菌株提高46%。