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目的:检测泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzymes 9,UBC9)在肝癌细胞中的表达,并采用shRNA方法研究下调UBC9后的肝癌细胞增殖、凋亡的改变及其可能的机制。方法:1、采用蛋白印迹(Western Blot)技术检测人肝癌细胞株HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721中UBC9的表达。2、设计并合成针对UBC9的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,采用阳离子脂质体技术进行瞬时转染。实验设置正常肝癌细胞组、脂质体组、空载质粒(NC-shRNA)组以及目的质粒(UBC9-shRNA)组。3、采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real Time-PCR,qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)技术分别检测各组细胞UBC9在转染前后mRNA及蛋白水平的表达。4、采用CCK8法检测转染前后肝癌细胞增殖能力的变化,通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测转染前后肝癌细胞凋亡的变化。5、采用蛋白印迹(Western Blot)技术检测各组细胞中Bcl-2以及NF-κB p65蛋白表达水平的改变。结果:1、在HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721这5种肝癌细胞株中UBC9蛋白表达均呈阳性高表达,UBC9表达量最高的是MHCC97h、最低的是LM3,HepG2、SMMC-7721、Huh7这3中细胞中UBC9表达量没有统计学差异。2、目的质粒UBC9-shRNA转染肝癌细胞24h及48h后,UBC9在mRNA水平(24h)以及蛋白水平(48h)相比较正常肝癌细胞组、脂质体组及空载质粒组均下降。3、CCK8法显示UBC9-shRNA组肝癌细胞的增殖能力明显下降,流式细胞仪显示UBC9-shRNA组肝癌细胞的凋亡水平最高。4、Western Blot技术显示,相比较正常肝癌细胞组、脂质体组及NC-shRNA组,UBC9-shRNA组中Bcl-2蛋白水平明显下降,NF-κB p65蛋白水平下降。结论:1、在肝癌细胞中UBC9为阳性高表达,本实验旨在研究肝癌细胞增殖与凋亡的变化,故选取HepG2肝癌细胞做后续实验。2、目的质粒UBC9-shRNA能够下调肝癌细胞中UBC9的表达,下调UBC9后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞的凋亡增加。3、下调UBC9后,可能通过Bcl-2调节肝癌细胞的凋亡改变,可能通过NF-κB p65调节肝癌细胞增殖的改变。