鳄嘴花抗肝损伤及抗HBV作用的研究

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目的:在体内分别采用四氯化碳(CCl4)、α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)诱导小鼠肝损伤模型和体外CC14诱导L-02人正常肝细胞损伤模型,并通过测定相关指标,评价鳄嘴花(Clinacanthus nutans)(CN)对肝损伤的保护作用。采用HepG2.2.15细胞模型,测定其抗原的分泌量,评价鳄嘴花鲜榨汁含药血清体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)的效果。通过探讨鳄嘴花的抗肝损伤及抗HBV作用,为鳄嘴花进一步开发利用提供实验依据。方法:(1)鳄嘴花抗肝损伤作用的实验研究①将小鼠随机分为正常对照组、CC14模型组、阳性对照组、鳄嘴花鲜榨汁高、低剂量组(CN-JH组、CN-JL组)、鳄嘴花鲜药高、低剂量组(CN-FH组、CN-FL组)及鳄嘴花干药高、低剂量组(CN-DH组、CN-DL组),每天1次,持续给药15天。除正常对照组外,其余各组通过腹腔注射0.1%CC14花生油溶液进行急性肝损伤造模实验。测定并比较相关指标含量的变化及观察肝脏组织切片病理变化。②将小鼠随机分为正常对照组、ANIT模型组、阳性对照组、CN-JH组、CN-JL组、CN-FH组及CN-FL组,每天1次,持续给药15天。除正常对照组外,其余各组通过灌胃给予2%ANIT花生油溶液进行胆汁淤积性肝损伤造模实验。测定并比较相关指标含量的变化以及观察肝脏组织切片病理变化。③将SD大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组、鳄嘴花鲜榨汁组,每天2次,持续给药3天,腹主动脉采血,经处理后收集血清,分装备用。取对数生长期的L-02细胞分组:正常对照组、CC14模型组、阳性对照组、鳄嘴花鲜榨汁含药血清低、中、高剂量组(CN-SL组、CN-SM组、CN-SH组)。除了正常对照组外,其余5组用CC14造模6小时后终止造模,所有组加入相对应的血清干预2小时后终止培养,采用MTT法检测细胞的存活率及生长状态。另外,将收集好的L-02细胞进行匀浆,根据试剂盒说明书用酶标仪检测细胞匀浆中GPT、GOT、MDA、SOD的含量。(2)鳄嘴花鲜榨汁含药血清体外抗HBV的实验研究将SD大鼠随机分正常对照组、鳄嘴花鲜榨汁组。每天2次,持续给药3天,腹主动脉采血,经处理后收集血清,分装备用。取对数生长期的HepG2.2.15细胞接种于96孔细胞培养板,37℃,5%C02培养箱中培养。用于监测HepG2.2.15细胞上清液中标志性抗原HBsAg、HBeAg的含量。铺板,细胞分组:细胞对照组、鳄嘴花鲜榨汁含药血清高、中、低剂量组(CN-SH组、CN-SM组、CN-SL组)。随时观测细胞的生长状态,收集上清液检测其HBsAg、HBeAg的含量,同时采用MTT法检测HepG2.2.15细胞的存活率。结果:(1)鳄嘴花可以降低CCl4肝损伤小鼠血清中ALT、AST、肝组织中MDA的含量及肝脏指数,且提升SOD及GSH-Px的活性,改善肝组织损伤程度;鳄嘴花能够降低ANIT肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL及肝组织中MDA的含量,且提升SOD、GSH-Px的活性,改善肝组织损伤程度;鳄嘴花鲜榨汁含药血清可以改善CCl4致损后L-O2细胞的存活率,可降低细胞匀浆中GPT、GOT、MDA的含量,提高SOD的活性。(2)MTT实验结果显示,鳄嘴花鲜榨汁含药血清对HepG2.2.15细胞具有一定的细胞毒性作用,且具有一定的时效和量效关系;鳄嘴花鲜榨汁含药血清能抑制HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg分泌量,于给药第6天时抑制率达到高峰值。结论:1.鳄嘴花对体内CCl4诱导的小鼠肝损伤和体外CCl4诱导的L-O2细胞损伤都具有一定的保护作用,其作用机制可能与其本身具有很强的抗氧化及减少脂质代谢终产物的生成有关。2.鳄嘴花对ANIT诱导小鼠胆汁淤积性损伤具有改善和干预作用,其作用机制可能与抗氧化作用,降低血清内转氨酶,降低胆红素,利胆退黄作用有关。3.鳄嘴花鲜榨汁含药血清在体外细胞培养中对HBsAg、HBeAg的分泌具有一定的抑制作用。
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