拟南芥MPK9基因启动子的克隆及功能分析

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MAP激酶是一类于各种真核生物体中广泛存在的丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶。MAPKs和其它一系列激酶组成MAPK级联信号通路,接受外界信号,将信号转入细胞内调控特定基因表达,从而控制细胞生物学反应,利如细胞增殖、分化、转化及凋亡等等。但是与动物中广泛存在的蛋白激酶研究相比,对植物蛋白激酶的研究报道还很少。研究结果表明植物MAPKs受到生物、非生物及植物激素的影响并参与调控细胞生物学过程的各个方面。所以,开展研究MAPKs在信号转导中的作用机制,将对人为控制植物的生长发育和增强抗逆性产生巨大的意义。  目前已在拟南芥体内分离出20余种MAPKs基因,并命名为MPKs,包括丝氨酸/苏氨酸结构域的TEY与TDY两个亚族。对TEY亚族的研究已有很多报道,但还没有见到对拟南芥TDY族MPKs的报道。从已报道的几个其它高等植物MAPK的研究结果可见, TDY族MAPK基因亦在植物的细胞分化、病理反应以及机械受伤机理中产生作用。本研究首次对TDY族的MPK9、MPK17基因结构和功能进行探讨,期望促进该领域的研究进展。  本实验室曾对MPK17进行了一系列的激素响应研究,然而激素处理后在表型上拟南芥MPK17突变体与野生型之间并无显著差异。这可能与MPK17同源基因在功能上互补或者MPK17基因功能是冗余的有关,为此,有必要通过构建双突变体的方法对MPK17基因功能进行深入研究。MPK9与MPK17的基因序列具高度同源性,可以成为最佳的双突变体选择对象。因此,本研究一方面构建MPK17∷MPK9双突变体,另一方面通过DNA重组技术对MPK9基因的表达部位及功能进行探讨,以便深入了解MPK17和MPK9两个同源基因的功能。  目前我们在遴选MPK9纯合体的基础上,通过杂交技术已得到F3代的种子,双突变体的纯合体正在筛选当中。利用基因重组技术,已从拟南芥野生型植株体内成功克隆出MPK9基因的启动子,并融合GUS报告基因,通过农杆菌介导的floral-dip法转入野生型拟南芥(Col)中,并得到大量的T1代重组子。  PMPK9∷GUS转基因拟南芥后代的筛选及后期胁迫处理工作仍在进行中。
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