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本研究旨在对怀地黄转基因和组织培养突变品系(简称突变品系)HW进行扩繁、移栽、田间种植和鉴定,对怀地黄基因克隆进行探索,为怀地黄新品种培育和基因研究提供依据。
1、建立了怀地黄转基因和组织培养突变品系扩繁和移栽技术体系,实现了其田间的成功种植,从形态、叶绿素含量、还原糖和总糖含量、单株块根鲜重和数目、叶脱分化和再分化能力和DNA分子水平对其进行了鉴定。突变品系叶多上翘,对照85-5叶外翻,叶片长于对照,多宽于对照;植株等于或高于对照,其中,HW-7和HW-8两个品系最高,达35cm;7个突变品系的叶绿素含量高于对照,5个突变品系的叶绿素含量低于对照;4个突变品系的还原糖含量高于或等于对照,1个突变品系的还原糖含量低于对照,而5个突变品系的总糖含量都高于对照;5个突变品系的单株块根鲜重在0.465-0.742g之间,其中3个突变品系的单株块根鲜重高于对照,HW-12比对照增加15％;5个突变品系的单株块根数目均多于对照;在一定培养基上,突变品系HW-12的愈伤组织诱导率达100％,高于或等于对照的。其愈伤组织分化芽的能力也居第二位;一个SRAP引物组合(em2/em17/em18)从突变品系基因组DNA中扩增出一个对照没有的约400bp的DNA片段。
2、克隆了一个新的怀地黄基因片段及其中的一个开放阅读框。根据已知裂叶牵牛的PNZIP启动子碱基序列设计一对引物,用PCR方法从怀地黄基因组中扩增出5个DNA片段,克隆了其中一个大小近似于裂叶牵牛的PNZIP启动子的1096bp的DNA片段。经在NCBI中BLAST一些基因序列比对分析,发现其是一个类似于转座子的基因序列,而且其中含有一个可以编码150个氨基酸的450bp完整的开放阅读框,克隆得到此开放阅读框。