生物芯片是指包被在硅片、尼龙膜等固相支持物上的高密度的组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其它生物组分的微点阵,芯片与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号即可实现对生物样品的分析。生物芯片技术,被喻为21世纪生命科学的支撑技术,不仅用于细菌鉴定,在检测基因的表达,研究生物体对逆境的反应,研究生物体对光线的反应、环境检测、发现新基因等各个领域也有着广阔的应用前景。尤其是在动物产品的微生物检验中的应用越米越广泛。本文对进出口猪肉及其产品中沙门氏菌、单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌和大肠杆菌O157:H7检测试剂盒芯片进行了保存试验和灵敏度试验,为进出口猪肉及其产品中此五种致病菌快速检测的生物芯片应用条件和有效期提供科学依据。根据保存试验设计,本试验选取微生物检测试剂盒芯片裸露放置于37℃环境中,用试剂盒所能检测出的五种致病菌(大肠杆菌O157:H7、李斯特氏菌、沙门氏菌、空肠弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌)对芯片进行稳定性检测试验。从零天起,每天取37℃保存的芯片抽真空放于4℃保存,至第七天将所有4℃保存芯片取出,参照试剂盒说明,分别对五种致病菌进行基因组DNA提取、PCR扩增、PCR产物凝胶电泳,并将五种菌的PCR产物混合后与上述保存芯片进行杂交,42℃恒温水浴杂交2小时,洗片后,芯片用晶芯(?)食源性致病微生物检测分析系统进行扫描判读。试验共进行7天,相当于20℃下芯片保存10.5个月。试验结果显示,所有五种菌的检测值与检测限之间均存在显著性差异,且信号强度大于检测限,检测结果均为阳性。证明该微生物检测试剂盒芯片能在37℃下稳定保存7天,也就是说即在4℃条件下保持其稳定性及活性的时间可达到10.5个月以上。根据灵敏度试验设计,采用人工培养的细菌进行检测试验,选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、李斯特氏菌和空肠弯曲杆菌,在通用培养基营养肉汤中接种,过夜培养16h,次日取菌液进行浓度测定,定量后的菌液取一定量提取基因组DNA,对基因组DNA进行定量检测,分别取5ng、2.5ng、1ng、0.5ng进行PCR扩增,电泳检测PCR扩增产物,对扩增产物进行杂交检测。试验结果显示,试剂盒的灵敏度在不同细菌间会有微弱的差异,但在大于8.7×10~4 cfu的范围,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、李斯特氏菌和空肠弯曲杆菌均可以很好的检测出目标细菌,而大肠杆菌O157:H7和李斯特氏菌的灵敏度更高,所以,可以认为,在经过对样品增菌培养后,试剂盒的灵敏度为8.7×10~4 cfu/mL。