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目的:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ—PCR)方法检测湿证大鼠及正常大鼠脾淋巴细胞T细胞受体可变区β(TCRVβ)基因谱表达,寻找湿证有规律变化的TCRVβ亚家族基因表达谱。
方法:⑴实验对象健康SD大鼠,体重(230±10)g,雌性,由中山大学动物中心提供。⑵法将大鼠32只随机分为4组,每组8只,分别为正常组(常规饮食,自然环境)、内湿组(高脂高糖饮食,自然环境)、外湿组(常规饮食,高湿环境),内外湿组(高脂高糖饮食,高湿环境)。观察20天。⑶观察指标各组按随机数字表选3只大鼠检测其TCRVβ亚家族表达水平。
结果:①全组比较:TCRVβ1(F=32.637, P<0.001)、TCRVβ7(F=5.299, P<0.05)、TCRVβ9(F=7.283, P<0.05)、TCRVβ13(F=21.975, P<0.001)、TCRVβ18(F=10.508, P<0.01)表达差异具有统计学意义。②外湿组与正常组比较:TCRVβ1(P<0.001)、TCRVβ7(P<0.05)、TCRVβ9(P<0.01)、TCRVB10(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)具有统计学意义;外湿组的上述TCRVβ谱系表达都比正常组高。③外湿组与内湿组比较:TCRVβ1(P<0.001)、TCRVβ7(P<0.05)、TCRVβ12(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)、TCRVβ18(P<0.05)具有统计学意义;外湿组的TCRVβ1、TCRVβ7、TCRVβ13、TCRVβ18表达比内湿组高,而外湿组的TCRvβ12表达比内湿组低。④外湿组与内外湿组比较:TCRVβ1(P<0.001)、TCRVβ7(P<0.01)、TCRVβ9(P<0.05)、TCRVβ10(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)、TCRVβ18(P<0.01)具有统计学意义;外湿组的上述TCRVβ谱系表达都比内外湿组高。⑤内湿组与正常组比较:TCRvβ8(P<0.05)、TCRVβ9(P<0.05)、TCRVβ14(P<0.05)、TCRVβ18(P<0.01)具有统计学意义;内湿组的TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ18表达比正常组低,而内湿组的TCRVβ9表达比正常组高。⑥内湿组与内外湿组比较:只有TCRVβ17(P<0.05)具有统计学意义;内湿组的TCRVβ17表达比内外湿组高。⑦内外湿组与正常组比较:TCRVβ8(P<0.05)、TCRVβ18(P<0.01)、TCRVβ19(P<0.05)具有统计学意义;内外湿组的TCRVβ8、TCRVβ18表达比正常组低,而内外湿组的TCRVβ19表达比正常组高。
结论:⑴与正常组比较,实验组的TCRVβ亚家族表达紊乱,TCRVβ1、TCRVβ7、TCRVβ9、TCRVβ13、TCRVβ18表达差异具有统计学意义。在内、外湿致病因素不同的刺激引起的TCRVβ相关亚家族的选择性表达不一样。实验过程中,所有内湿、外湿、内外湿大鼠出现不同程度出现湿邪致病的表现。⑵在外湿组多数TCRVβ亚家族比正常组表达升高,而内湿组及内外湿组均比正常组表达低下。提示在外湿环境中,机体可能对外在相关抗原产生反应,通过TCRVβ相关亚家族的选择性表达来激活相应的T细胞增殖来产生有效的免疫反应:在内湿的环境中,TCRVβ相关亚家族的选择性表达受到抑制,即使在此基础上予以外湿刺激,也未能改变这种情况,提示可能是内湿之邪具有“蒙蔽性”,进而导致湿邪致病大鼠免疫功能障碍。