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犬新孢子虫是一种专性细胞内寄生原虫,主要引起奶牛流产、死胎等一系列繁殖障碍和犬的神经系统疾患。造成畜牧业特别是奶牛业严重的经济损失,目前治疗该病没有特效药物,所以防治该病寄希望于疫苗的研究。
新孢子虫的表面抗原SAG1和SRS2在入侵宿主细胞时起着非常重要的作用,并能引起宿主的免疫应答。目前对这两个基因免疫作用的研究比较多,证明他们能有效地引起宿主产生保护性反应。本实验室前期工作中已经成功地构建了这两个基因的融合基因,并在大肠杆菌中成功地进行了表达,该融合基因表达的蛋白能引起小鼠很强的细胞免疫。证明该融合基因有一定的研究价值。
本研究是在前期研究工作的基础上,将NcSAG1基因和NcSAG1-NcSRS2融合基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,成功构建了真核表达质粒pcDNA-SAG1和pcDNA-SAG1-SRS2。应用脂质体转染技术,将二者导入COS-7培养细胞中,用间接免疫荧光试验,检测蛋白的表达,显示这两个质粒均在细胞中表达出蛋白。将两质粒分别分成高(300μg/只)、中(200μg/只)和低(100μg/只)三个剂量免疫小鼠,并设不加佐剂的低剂量对照和阴性对照。来研究不同剂量质粒诱导小鼠体内的免疫反应效果。通过ELISA和淋巴细胞增殖试验,检测构建的这两个真核表达质粒在小鼠体内引起的体液免疫和细胞免疫反应。
结果显示,构建的核酸疫苗pcDNA-SAG1和pcDNA-SAG1-SRS2都能诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应,并且左旋咪唑佐剂能对免疫反应起到一定促进作用。经单因素方差分析,pcDNA-SAG1-SRS2高剂量免疫组和阴性对照组细胞免疫水平差异显著。
pcDNA-SAG1-SRS2与pcDNA-SAG1相比能诱导小鼠产生更高的细胞免疫水平,但差异不显著。本研究为新孢子虫病的免疫研究提供了基础数据和资料。