【摘 要】
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本研究采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白介素-8(Interleukin-8,IL-8)基因在京海黄鸡感染(感染Ⅰ组每只鸡灌饲7500个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,感染Ⅱ组每只鸡灌饲1.5万个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊)和未感染(对照组每只鸡灌饲生理盐水)情况下的表达情况,并对感染不同天数和不同剂量下的京海黄鸡血浆中抗性指标进行检测。利用DNA测序技术,检测京海黄鸡IL-8基因上游-200
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本研究采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白介素-8(Interleukin-8,IL-8)基因在京海黄鸡感染(感染Ⅰ组每只鸡灌饲7500个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,感染Ⅱ组每只鸡灌饲1.5万个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊)和未感染(对照组每只鸡灌饲生理盐水)情况下的表达情况,并对感染不同天数和不同剂量下的京海黄鸡血浆中抗性指标进行检测。利用DNA测序技术,检测京海黄鸡IL-8基因上游-2000 bp 至下游 1000 bp 的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs),对5’端调控区的SNPs进行生物信息学分析,并将所有SNPs与球虫抗性指标进行关联分析。结果如下:1、IL-8基因在感染第7 d时,在各个组织中均有表达,且在大部分组织中感染组的表达量均高于对照组。其中感染Ⅱ组的IL-8基因在肝脏中表达量显著高于其他两组(P<0.05),在脾脏和盲肠中表达量极显著高于其他两组(P<0.01),在法氏囊和胸腺中表达量显著高于对照组(P<0.05)。2、比较感染不同天数和不同剂量对京海黄鸡血液生化指标和抗氧化指标的影响结果发现:在感染第3d时不同试验组的碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)和葡萄糖(Glucose,GLU)指标之间有显著性差异(P<0.05),感染第7 d时不同试验组的ALP、总蛋白(Total protein,TP)、球蛋白(Globulin,GLOB)、肌酐(Creatinine,CRE)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、钙(Calcium,Ca)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、IL-2、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)与 IL-8指标之间有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异。3、测序结果与GenBank上序列进行比较后,共发现了 42个SNPs,新发现的突变位点有4个。其中位于5’端调控区的SNPs有14个,包括1个新发现的SNP;位于第1内含子的SNPs有7个,包括1个新发现的SNP;位于第2、3内含子的SNPs共有12个;位于3’端非编码区(Untranslated region,UTR)的SNPs有9个,包括2个新发现的SNPs。4、将IL-8基因全序列检测到的SNPs与球虫抗性指标关联分析后发现共有15个SNPs与抗性指标有关联,这些位点有5个位于5’端调控区,有6个位于内含子区,有4个位于3’端非编码区,这些突变可能对球虫抗性指标有一定的调控作用。5、对这15个SNPs进行单倍型分析,并与抗性指标关联,结果表明:5’端的 H1H3 单倍型组合的 SOD、CAT、白介素-1β(Interleukin-1-β,IL-1β)、IL-6、IL-8和γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)指标均高于其他三种单倍型组合,CAT和IL-6指标分别极显著(P<0.01)与显著(P<0.05)的高于H3H3单倍型组合,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)指标显著低于H3H3单倍型组合(P<0.05),IL-8指标极显著高于H1H1单倍型组合(P<0.01),表明了 H1H3单倍型组合为优势单倍型组合。内含子的H6H7单倍型组合的SOD、谷胱甘肽过氧化物(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、CAT、IL-8 和 IFN-γ 指标均高于其他三种单倍型组合,H5H7和H6H7单倍型组合的GSH-Px与IL-8指标均显著高于H5H5单倍型组合(P<0.05);H6H7单倍型组合的CAT指标显著高于H5H5单倍型组合(P<0.05),表明了 H6H7单倍型组合为优势单倍型组合。3’端的H9H11单倍型组合的SOD、GSH-Px、NO、IL-2、IL-6和IL-8指标均高于其他三种单倍型组合,H9H11单倍型组合的SOD与IL-2指标显著高于H9H9单倍型组合(P<0.05),NO指标显著高于H9H10单倍型组合(P<0.05),表明H9H11单倍型组合为优势单倍型组合。
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