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乙型肝炎病毒(HBV)感染会造成一系列不同的疾病结局,其中乙肝表面抗原(HBs Ag)携带者就是由于HBV慢性感染造成的,他们平时无临床症状和肝功能的异常,但是体内却有HBV的潜伏。这类人群可能会突然出现HBV的再次活动,即HBV再激活。目前关于HBV再激活的研究多集中于临床患者,尤其是接受化疗、放疗以及器官移植的人群,而基于社区人群的HBV再激活研究少有报道,这给HBV慢性感染者的防治带来了挑战。目的:本研究通过巢式病例对照研究查明HBV再激活相关的危险因素;通过免疫学检测手段,探索HBV再激活的分子机制,为评估HBs Ag携带者的抗病毒治疗时机提供科学依据。方法:1.选择2010年武威市乙型肝炎防治示范区经社区健康体检查明的HBs Ag携带者作为研究队列,分别于2012年、2014年、2016年、2018年对该队列人群开展4次随访,结合HBV再激活判定标准,将随访期间发生HBV再激活的对象纳入病例组,随机抽取未发生HBV再激活者纳入对照组。利用自行编制的调查问卷进行HBV再激活相关危险因素调查,并采集研究对象血清进行乙肝相关血清学标志物以及实时荧光定量检测,同时提取HBV DNA并扩增S区序列,经过序列比对分析HBV基因型以及氨基酸位点突变。2.选择HBV再激活者、HBs Ag携带者和慢性乙肝患者(CHB)三组研究对象,采集其基本情况和收集血清标本,利用ELISA法检测研究对象血清中Th1、Th2型细胞因子的水平,通过对比三组Th1/Th2的比值来判断Th1/Th2的平衡关系,分析HBV再激活的免疫分子机制。3.所有数据均采用SPSS23.0软件进行统计分析。服从正态分布的计量资料使用t检验,计数资料使用卡方检验,多因素分析采用logistic回归分析。偏态分布的计量资料采用(M,Q1-Q3)表示,三组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。判断数据间的相关分析采用Spearman秩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.累计随访到发生HBV再激活者119例,其中有76例HBV DNA由不可测转为可测,43例HBV DNA升高10倍以上。2.单因素分析中发现,吸烟(OR=1.905,95%CI:1.132-3.207)、一年内多次感冒(OR=2.090,95%CI:1.292-3.381)、外出打工史(OR=2.007,95%CI:1.113-3.553)和负性生活事件(OR=2.413,95%CI:1.490-3.905)与HBV再激活的关联有统计学意义。其他因素未见有统计学差异,这些因素包括饮酒、手术史、糖尿病史、高血压史、肺结核史和自身免疫性疾病史等。通过分析两组基线HBV DNA载量水平发现,HBV DNA载量≥10IU/ml与HBV再激活的关联有统计学意义(OR=1.951,95%CI:1.118-3.405)。3.采用多因素logistic回归分析,结果显示,吸烟(OR=2.279,95%CI:1.196-4.342)、一年内多次感冒(OR=2.105,95%CI:1.229-3.606)、负性生活事件(OR=2.168,95%CI:1.257-3.742)、HBV DNA≥10IU/ml(OR=2.282,95%CI:1.248-4.173)与HBV再激活的关联仍有统计学意义。4.随机提取部分HBV再激活者和HBs Ag携带者血清HBV DNA进行测序,再激活组成功测序71例,携带者组59例。所有序列扩增其S区基因并构建系统发育树,发现再激活组中D基因型最多(56.3%),其次为C基因型(32.4%)和B基因型(11.3%),携带者组中D基因型最多(61.0%),其次为C基因型(23.7%)和B基因型(15.3%),但三种基因型在两组之间的分布差异未见统计学意义(P=0.506)。5.将再激活组与携带者组HBV S区基因与相对应基因型的参考序列进行对比,结果显示,B、C、D基因型a抗原决定簇的突变率在再激活组与携带者组间均未见统计学差异(P>0.05)。B、C、D基因型中MHR区的氨基酸突变率在两组之间的差异也均未见统计学意义。进一步分析突变位点发现,B基因型S区的126位、143位、161位氨基酸容易发生突变,C基因型S区的114位、126位的氨基酸较容易发生突变,D基因型S区的第122位、130位、131位以及143位氨基酸容易发生突变,而且已发生突变的位点在各基因型中各有差异。6.TNF-α水平在HBV再激活者、HBs Ag携带者和CHB患者三组间均呈偏态分布,三组间差异有统计学意义(P=0.011);三组中IL10水平均属于偏态分布,三组间差异无统计学意义。进一步做两两组间TNF-α水平的比较发现,HBV再激活组与CHB组的TNF-α水平的差异有统计学意义(P=0.016),HBV再激活组TNF-α水平高于CHB组。7.HBs Ag携带者组的TNF-α与ALT水平相关分析的Spearman相关系数为0.304(P=0.017),即HBs Ag携带者组TNF-α与ALT水平呈正相关关系。HBV再激活组TNF-α与AST水平相关分析的Spearman相关系数为0.404(P=0.005),提示再激活组血清中TNF-α与AST水平之间存在正相关关系。8.通过比较HBV再激活者、HBs Ag携带者和CHB患者三组的Th1/Th2比值发现,三组Th1/Th2比值之间的差异有统计学意义(P<0.05)。进一步组间两两比较发现,再激活组与CHB组Th1/Th2比值之间的差异有统计学意义(P=0.013),再激活组Th1/Th2比值高于CHB组。结论:1.吸烟、一年内多次感冒、负性生活事件和HBV DNA≥10IU/ml可能是社区人群HBsAg携带者HBV再激活发生的重要危险因素。2.TNF-α参与HBV再激活过程中肝细胞的损伤,Th1/Th2平衡向Th1型方向漂移可能是HBV再激活的相关免疫分子机制之一。因此,HBs Ag携带者在HBV DNA可测的情况下,如果又具有吸烟、易感冒和经历负性生活事件的特征,则发生HBV再激活的风险将会增大,对其的随访管理应从乙肝防治指南建议的每半年一次增加到每三个月一次,及早预防不良转归发生。