【摘 要】
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该项研究侧重于探索和建立人表皮干细胞的体外分离和体外培养体系的方法,使得运用表皮干细胞体外构建皮肤成为可能,也为进一步研究人表皮干细胞的机制搭建一个研究的平台.材
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该项研究侧重于探索和建立人表皮干细胞的体外分离和体外培养体系的方法,使得运用表皮干细胞体外构建皮肤成为可能,也为进一步研究人表皮干细胞的机制搭建一个研究的平台.材料和方法:以小儿包皮作为分离培养表皮干细胞的皮肤来源,应用Dispase II分离酶消化法获得小儿表皮,并制成单表皮细胞悬液,再采用表皮干细胞条件培养液培养法置于37℃5﹪CO<,2>培养箱中培养,从而分离培养出表皮干细胞.表皮干细胞条件培养液中含有适量的表皮细胞生长因子(EGF),是通过在表皮细胞基础培养液中加入不同浓度的EGF,根据细胞的生长情况,筛选出合适的EGF浓度.此外,还探索了传代培养所用消化酶的浓度和消化时间.最后观察所得细胞是否呈克隆状生长,并采用免疫组化染色法检测β<,1>整合素和角蛋白19的表达水平.结论:采用0.375﹪的Dispase II酶分离出小儿包皮的表皮,用0.05﹪胰蛋白酶将表皮分离成单个细胞,选用含15ng/ml EGF的无血清SFM培养液作为表皮干细胞的条件培养液,置于37℃5﹪CO<,2>培养箱中培养,所获得的细胞β<,1>整合素和角蛋白19免疫组化染色均为阳性.研究表明,此方法是一种简便、快速、经济的表皮干细胞分离和培养的方法.
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