Exosome是由细胞多泡体外泌到细胞外的膜性小囊泡。他们参与了多种生理、病理过程，有望成为生物医学研究和应用开发的技术平台。但exosome的体积小，密度低，提取过程繁杂、产量也低，从而制约了对exosome的进一步研究。资料表明，exosome的外泌与胞内Ca2+浓度变化有一定关系。诱导Ca2+内流的Na+/H+交换剂（monensin）可促进K562细胞源性exosome的外泌。而Ca2+拮抗剂BAPTA-AM可抑制此过程。 三氧化二砷，是砒霜的主要成分，对急性早幼粒细胞性白血病（APL）有较好疗效，也具有促进肝癌等多种肿瘤细胞凋亡的作用。同时有研究表明，三氧化二砷具有提高胞内Ca2+浓度的作用。结合这些特点本研究选用三氧化二砷作为干预因素，探讨小鼠肝癌细胞（H22）源exosome外泌的变化。 资料显示：膜融合机制--SNARE（soluble NSF attachment protein receptor）是解释神经内分泌细胞胞吐过程的机制之一。此过程受胞内Ca2+影响。exosome的生成与循环过程，与神经递质出入神经元的胞吐与胞吞过程类似，且exosome与神经内分泌囊泡在形态和大小上也非常接近。本研究拟检测小鼠肝癌细胞（H22）在外泌exosome过程中有无SNARE相关蛋白的表达及表达变化。为进一步探讨和阐明exosome外泌机制奠定基础。另外，也观察exosome与三氧化二砷联合应用对小鼠皮下种植性肝癌模型的治疗效应。 方法： 1三氧化二砷对小鼠肝癌细胞（H22）源exosome外泌的影响：用MTT法测定H22细胞生长曲线，确定三氧化二砷对H22细胞抑制率为10％的药物浓度，并确立H22细胞源exosome提取的最佳收集细胞培养液时间；采用超速分级离心和蔗糖密度梯度离心法提取纯化exosome；利用Bradford法定量exosome总蛋白；借助荧光探针Fura-2和倒置荧光显微镜测Ca2+系统检测细胞胞内Ca2+的变化；采用免疫印迹法（Western blot）检测SNARE复合物相关蛋白--syntaxin。 2三氧化二砷与小鼠肝癌细胞（H22）源exosome联合应用对小鼠皮下种植性H22肝癌模型的治疗性研究：小鼠皮下接种H22细胞（5×105个/只）后的第2天开始腹腔注射三氧化二砷，1次/天，连续10 d。第4天开始皮下注射H22源exosome，每隔4天一次，连续3次。观察各组肿瘤生长情况。于肿瘤细胞接种后第25天记录存活率，处死存活小鼠称取体重并解剖肿瘤称瘤重，计算肿瘤抑制率。免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润情况。 结果： 1三氧化二砷对小鼠肝癌细胞（H22）源exosome外泌的影响： 1.1密度为5×104个/ml的H22细胞在培养的第24～48 h生长最活跃，即为对数生长期。三氧化二砷对H22细胞48 h抑制率为10％的药物浓度是1.25μmol/L。从200ml H22细胞上清液中可提取exosome2ml。三氧化二砷实验组与对照组exosome总蛋白浓度分别为（0.96±0.10）mg/ml、（0.85±0.13）mg/ml（P<0.05）。 1.2倒置荧光显微镜测Ca2+系统显示，对照组H22细胞胞内Ca2+相对浓度为0.58±0.04。用1.25μmol/L三氧化二砷的培养液培养6、12、24、48 h后H22细胞内Ca2+相对浓度分别为0.62±0.04、0.71±0.03、0.78±0.03、0.68±0.03（P<0.05）。 1.3 Western blot结果表明，用1.25μmol/L三氧化二砷的培养液培养12、24、48 h后，H22细胞表达syntaxin蛋白量增多。 2三氧化二砷与小鼠肝癌细胞（H22）源exosome联合应用对小鼠皮下种植性肝癌模型的治疗性研究： 2.1小鼠皮下种植性肝癌（H22）的生长情况： 从小鼠皮下接种H22细胞后第16天开始呈现出差异：两联合组、三氧化二砷组肿瘤的平均体积小于同一天对照组肿瘤的平均体积（P<0.05），也小于EXOn组、EXOa组肿瘤的平均体积（P<0.05）；两联合组之间，联合组与三氧化二砷组之间无差异（p>0.05）。从第20天起，联合组肿瘤的平均体积小于同一天三氧化二砷组肿瘤的平均体积（P<0.05），也小于对照组肿瘤的平均体积（P<0.05）。两EXO组间及两联合组间肿瘤体积自始至终无差异（P>0.05）。两EXO组与对照组自始至终无差异（P>0.05）。 2.2各组小鼠的存活率： 小鼠皮下接种H22，肝癌细胞的第25天，对照组、三氧化二砷组、（三氧化二砷+EXOn）联合组、（三氧化二砷+EXOa）联合组、EXOn组、EXOa组小鼠的存活率分别为30％、50％、70％、80％、30％、30％。各组小鼠的生存率有差异，但是统计分析尚不能得出差异有统计学意义。 2.3小鼠肝癌（H22）的肿瘤抑制率： 三氧化二砷组、（三氧化二砷+EXOn）联合组、（三氧化二砷+EXOa）联合组、EXOn组、EXOa组的肿瘤抑制率分别为44.58％、66.27％、65.06％、4.82％、6.03％。 2.4肝癌（H22）组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润： 对照组、三氧化二砷组、（三氧化二砷+EXOn）联合组、（三氧化二砷+EXOa）联合组、EXOn组、EXOa组肝癌组织中CD4+T淋巴细胞的平均光密度值分别为0.12±0.02、0.18±0.03、0.32±0.08、0.34±0.06、0.13±0.05、0.14±0.04。CD8+T淋巴细胞的平均光密度值分别为0.11±0.01、0.15±0.02、0.18±0.04、0.20±0.03、0.13±0.02、0.12±0.03。与对照组比较，两EXO组（EXOn、EXOa）无统计学差异（P>0.05）；联合组、三氧化二砷组有统计学差异（P<0.05）。与三氧化二砷组比较，联合组有统计学差异（P<0.05）。两联合组之间、两EXO组之间无统计学差异（P>0.05）。 结论： 1、低浓度三氧化二砷（1.25μmol/L）能够提高细胞内Ca2+浓度，促进syntaxin蛋白表达，促进小鼠肝癌细胞（H22）exosome的分泌。说明小鼠肝癌细胞源exosome的外泌过程与神经内分泌胞吐过程相似。 2、exosome与三氧化二砷对小鼠皮下H22种植性肝癌模型有协同治疗效应，说明exosome在肿瘤的治疗方面也有一定作用。