论文部分内容阅读
替硝唑（TNZ）属于硝基咪唑类药物，在动物源性食品中的残留对人具有潜在致癌性，农业部规定在动物源性食品中的最大残留限量为零。本研究通过对KM小鼠的血液、肌肉、肝脏的残留检测，选择最适宜的TNZ残留检测部位；根据本实验所使用的反相高效液相色谱法（RP-HPLC），为相关的检测部门提供动物性食品中比较简便可行的TNZ快速无损检测的RP-HPLC法；探讨TNZ对机体可能产生的毒性反应，为动物性食品的安全性提供可靠的毒理学依据；还根据RP-HPLC法所测定的TNZ在血液、肌肉和肝脏中的浓度数据，模拟出TNZ在KM小鼠机体内的代谢消除趋势，由此测算其代谢消除时间，为推测动物性食品中TNZ代谢消除时间提供参考。 将100只实验小鼠分为两批。第一批60只KM小鼠分为5组，使用灌胃法每日按照100mg／kg体重的剂量灌胃TNZ药液，连续5d。5d后，按照投药后不同时间段进行处死采样。采样结束后将血浆样品在13000r／min，4℃离心10min，分离出血清以后，吸取0.5ml血清加入0.2ml的甲醇，涡旋混合1min后再加入0.8ml乙腈，涡旋3-5min至混合均匀，静置10min以上。然后以10000r／min，4℃离心10min后，再次以相同条件将上清液离心，取上清液进行HPLC测定。肌肉、肝脏组织样经过匀浆处理后取0.5g，后面处理同血液样品。 第二批40只KM小鼠进行30d的蓄积性毒性实验。分为4组，按照0mg／kg、100mg／kg、500mg／kg、1000mg／kg体重进行灌胃TNZ药液。30d以后进行处死采样。进行血液生化指标测定的部分取0.3ml血清加入酶试剂以后，使用全自动生化分析仪进行检测；进行TNZ残留含量测定的部分按照第一批血样与组织样的处理办法处理后，上机检测。 HPLC测定采用Phenomenex Hyperclone BDS—C18柱（150×4.6mm，5μm），以甲醇：水（25：75）为流动相，流速1.0ml／min。检测温度30℃，紫外检测波长310nm。 结果表明，TNZ在血液与肌肉的残留期长，残留量高，但是肌肉的回收率与精密度更好，所以应该选择肌肉作为检测的目标。为了防止漏检，可同时检测血液作为参考。 通过本实验所采取的RP-HPLC法，可以实现TNZ在动物性食品中的快速无损检测。样品损耗少，检出率高，相对回收率高，变异系数较小。在不同的组织中相对回收率不同。血液与肌肉的平均相对回收率＞95％，肝脏中平均相对回收率＞82％；血液与肌肉的日内变异系数均＜7％；肝脏的平均日内变异系数＜18％；日间变异系数：肌肉（9％）＜血液（13％）＜肝脏（19％）。组织中的最低检测限为1.25×10-5μg／ml，最低定量限为1.25×10-4μg／ml。样品浓度范围在0.008—111.26μg／ml时标准曲线与峰面积呈线性关系。