抗香蕉枯萎病4号小种的枯草芽胞杆菌R31的发酵条件优化

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香蕉枯萎病是由Fusarium oxysporum f.sp. cubense引起的真菌病害,这种病害严重影响中国香蕉生产。枯草芽胞杆菌R31是分离自石斛兰中对香蕉枯萎病病原菌有很好拮抗作用的生防菌。本文首先利用盆栽试验研究了R31生防效果和芽胞数之间的相关性,然后以芽胞数为指标运用田口设计的方法对R31的液体发酵进行了优化。发酵优化后,实现了从摇瓶到50L罐的放大。结果总结如下:盆栽试验研究R31芽胞数和防效的相关性,结果表明两者存在明显的正相关(R2=0.9428),这为后文的发酵优化及以后的田间应用打下了基础。本实验利用Minitab15.0软件,采用了L18(21×35)的方阵表对六个影响显著的因子:pH、蔗糖、豆粕粉、NaCl, MgSO4, CaCO3、进行了三因素的优化,确定最适pH为7.0。最适的其它参数(g/L):蔗糖15 g/L,豆粕粉15 g/L,NaCl 1 g/L, CaCO33 g/L, MgSO42 g/L,最后优化出的产量是17.5×108cfu/mL,比初始配方7.0×108cfu/mL提高了2.5倍。在50 L的罐上进行了放大,控制溶氧在30%以上,成功的完成了250 mL摇瓶到50 L罐的放大。罐上培养30小时后芽胞数达到23.5×108cfu/mL,对发酵液进行喷雾干燥后收得率为61.68%。尝试了在武汉市温室中种植香蕉苗,经过探索,利用土培(黄土:泥炭土=6:4)培养方式获得了成功。该系统的建立为后续的机理研究工作打下了基础。
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