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Sirt1为一种依赖NAD的去乙酰化酶,参与调控生物体能量代谢、发育和衰老等多种重要生理过程。Sirt1在各生理过程中的精确表达是其行使正常功能的前提。多种因子在转录和转录后水平调控Sirt1的精确表达。Mi R-34a作为调控Sirt1关键的mi RNA,靶定Sirt1 3′UTR抑制Sirt1的表达。天然反义转录本(NATs)作为一种新发现的调控基因表达的关键因子,在表观遗传水平、转录水平及转录后水平参与正义基因的表达调控。生物信息学分析预测Sirt1反义链转录Sirt1 AS lncRNA,推测其通过调控Sirt1表达进而调控C2C12成肌细胞增殖。本实验通过生物信息学分析鉴定了Sirt1 AS lncRNA的存在,实时定量PCR分析其在小鼠各组织和C2C12成肌细胞增殖分化过程中的表达模式,并通过半衰期的检测分析其稳定性。随后构建Sirt1 AS lncRNA和miR-34a表达载体,通过转染C2C12细胞检测二者对Sirt1的表达调控,并通过同时过表达Sirt1 AS lncRNA和miR-34a验证二者的拮抗作用。进一步检测增殖标志基因(cyclinB、cyclinD和cyclinE)的表达并通过EDU、CCK8和流式细胞术技术检测C2C12成肌细胞增殖。最后通过荧光素酶报告及Sirt1mRNA稳定性分析验证Sirt1 AS lncRNA通过竞争miR-34a结合Sirt1 3′UTR调控Sirt1表达。主要研究结果:1.鉴定Sirt1基因反义链转录Sirt1 AS lncRNA本研究通过生物信息学分析预测Sirt1存在NATs,编码潜能分析证明其为非编码RNA,通过链特异性PCR扩增克隆Sirt1 AS lncRNA,并测序鉴定;Sirt1 AS lncRNA在小鼠各组织中广泛表达,在肌肉中表达量较低,在脾脏组织中表达量较高;此外其表达水平随C2C12细胞成肌分化而逐渐降低,而miR-34a的表达水平逐渐提高;在C2C12细胞中Sirt1 AS lncRNA的半衰期大约10h,Sirt1 mRNA的半衰期大约6h,Sirt1 AS lncRNA比Sirt1 mRNA稳定。2.Sirt1 AS lncRNA抑制miR-34a靶定Sirt1的作用进而提高Sirt1表达成功构建Sirt1 AS lncRNA和mi R-34a过表达载体,过表达效率分别为约1000倍和4倍(P<0.05);转染C2C12细胞证实Sirt1 AS lncRNA可提高Sirt1蛋白水平,相反mi R-34a降低Sirt1的蛋白水平,同时过表达二者证实Sirt1 AS lncRNA可一定成度抵消mi R-34a对Sirt1表达的抑制作用(P<0.05);荧光素酶报告及Sirt1 mRNA稳定性分析证实Srit1 AS lncRNA通过与mi R-34a竞争结Sirt1 3′UTR,提高Sirt1 mRNA稳定性促进Sirt1表达(P<0.05)。3.Sirt1 AS lncRNA通过抑制miR-34a作用促进C2C12细胞增殖同Sirt1表达趋势相似,Sirt1 AS lncRNA在C2C12细胞增殖后期表达升高,而mi R-34a在增殖后期表达量降低;Sirt1 AS lncRNA提高C2C12增殖标志基因cyclinB、cyclinD和cyclinE的表达(P<0.05),并可抵消miR-34a对增殖标志基因的下调;Sirt1 AS lncRNA通过抵抗miR-34a对C2C12细胞增殖的抑制作用促进C2C12细胞增殖。综上,本研究鉴定Sirt1 AS lncRNA,证明其通过与miR-34a竞争结合Sirt1 3′UTR抑制miR-34a的作用提高Sirt1表达,进而促进C2C12细胞增殖。