【摘 要】
：
肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）是国内外临床工作中常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。据最新统计,在中国肿瘤相关疾病致死率排名中,HCC占据第二位[1]。HCC具有发病隐匿、恶性程度高、病程进展快以及预后差等特点,已严重威胁我国乃至全球居民生命和健康,是亟需解决的重大公共卫生问题。反义RNA是一种内源性调节RNA,在人类和
【基金项目】
：
国家科学自然基金项目（编号:81773013;82001512）; 国家重点研发计划（编号:2016YFC1303604）; 国家自然科学基金重大研究计划（编号:91540117）; 江苏省科技计划面上项目（编号:BK20211118）; 江苏省卫生健康委医学科研面上项目（编号:M2021044）; 江苏省研究生培养创新工程项目（编号:KYCX19＿2113）; 扬州大学优秀博士学位论文基金资助项
论文部分内容阅读
肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）是国内外临床工作中常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程。据最新统计,在中国肿瘤相关疾病致死率排名中,HCC占据第二位[1]。HCC具有发病隐匿、恶性程度高、病程进展快以及预后差等特点,已严重威胁我国乃至全球居民生命和健康,是亟需解决的重大公共卫生问题。反义RNA是一种内源性调节RNA,在人类和小鼠中大量存在[2][3]。研究表明,反义RNA可通过影响正义基因的表达进而调节细胞的生长、凋亡、迁移等重要事件[4][5],但反义RNA在肿瘤发生发展进程中的作用及其分子机制所知甚少。本项目通过构建肝癌细胞HepG2双链cDNA文库进行高通量基因组测序,选择肝癌癌基因的反义RNA NRAS-AS作为研究对象,观察过表达和干扰NRAS-AS细胞生物学功能、基因表达及DNA甲基化修饰的变化,旨在阐明NRAS-AS在HCC发生发展进程中的作用及调控机制,对基础研究和临床医学研究均具重大意义。（1）肝癌原癌基因NRAS反义RNA的鉴定本章节首先选择AZA去甲基化处理、诱导反义RNA的表达,构建肝癌细胞HepG2双链cDNA文库进行基因组高通量测序,同时结合生物信息学和链特异性荧光定量PCR（strand specific RT-qPCR,ssRT-qPCR）首次筛选并鉴定NRAS基因存在反义RNA。在获得NRAS测序序列之后,进一步通过RACE（Rapid Amplification of c DNA Ends,RACE）技术成功从肝癌细胞中扩增出完整的NRAS-AS 5’端和3’端cDNA,基因全长 804bp,与GenBank已报道肝癌的NRAS的同源性在99.88%以上,将其命名为NRAS-AS。NRAS-AS全长序列的成功获得为其下一步生物学功能实验提供了重要基础。（2）反义RNA NRAS-AS的生物学功能研究本章节旨在研究NRAS-AS过表达和干扰后对HepG2细胞系和SMMC-7721细胞系生物学功能的影响。首先构建慢病毒稳转plv-NRAS-AS过表达和ASO干扰NRAS-AS,通过CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和流式细胞术等方法检测过表达和干扰NRAS-AS对肝癌细胞增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭等能力的影响。结果表明,当肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721过表达NRAS-AS后,能够抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,并且影响HepG2和SMMC-7721细胞周期分布,同时促进肝癌细胞的凋亡;而干扰NRAS-AS后可促进肝癌细胞侵袭的进展,抑制细胞凋亡,参与细胞周期进程。此外,体内构建裸鼠成瘤模型发现,相比于对照组,过表达NRAS-AS组裸鼠成瘤体积显著减小,通过免疫组织化学染色和Western blotting发现,过表达NRAS-AS后NRAS蛋白的表达显著降低,NRAS-AS在体内可能通过调控NRAS蛋白的表达的从而抑制成瘤能力。以上结果证实,NRAS-AS通过参与调控细胞增殖等各种生理活动,在肝癌的发生发展中起到抑癌作用,为后续研究分子调控机制奠定了基础。（3）NRAS-AS在肝癌中表达及NRAS-AS调控NRAS的分子机制初探为初步探索NRAS-AS调控NRAS的分子机制,本章节收集了自2018年至2020年于中国人民解放军总医院肝脾外科行手术切除的肝细胞癌患者45例临床组织样本及配套临床病理资料,系统评估了肝癌组织中高、低表达两组NRAS-AS与肝癌患者总胆红素水平、AFP水平、包膜情况、肿瘤大小及TNM分期存在相关性;通过RT-qPCR检测了肝癌组织和癌旁组织中NRAS-AS与NRAS基因的表达存在负相关;验证了肝癌组织和癌旁组织中NRAS基因的表达情况以及NRAS-AS表达;进一步通过免疫组化方法检测过表达NRAS-AS后肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中NRAS蛋白表达情况,结果与HepG2-GFP组相比,HepG2-NRAS-AS细胞中NRAS阳性蛋白表达量明显降低,SMMC-7721-NRAS-AS细胞中NRAS 阳性蛋白表达量也显著降低,提示NRAS蛋白的表达可能受到NRAS-AS调控,呈下降趋势。同时观察了 AZA处理对肝癌细胞反义NRAS-AS和正义NRAS基因表达的影响以及反义NRAS-AS与肝癌切除术患者预后密切相关。以上证明,NRAS-AS异常低表达是肝癌中的常见事件,且与NRAS基因的表达存在负相关,证明NRAS-AS可能通过调控正义NRAS基因参与到肝癌发生发展进程,反义RNA NRAS-AS将有望成为肝癌治疗潜在药物以及肝细胞癌诊断的潜在生物标记物。
其他文献
急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）是一种由于直接或间接致伤因素导致肺部细胞受损,产生失控性反应的肺病理性损伤。严重时则导致急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）,也是新冠肺炎主要的致死因素之一。此外,ALI是危害人类健康且死亡率高达40%的重大疾病。它因发病机制复杂而引起人们的重视。目前,已有许多研究表明,一些抗
RNA结合蛋白（RBP）是一类能与RNA结合来发挥其生物学活性的的蛋白质,在转录后调节中扮演着重要角色。异常表达的RNA结合蛋白与肿瘤的发生和发展关系密切。作为蛋白中的一类,RNA结合蛋白在肿瘤中的异常表达与基因组的改变、转录后调控和翻译后调控相关。由于作为上游因子调控下游RNA的表达、修饰、稳定性等,即使非常小的改变也可以对下游基因产生重大的影响。现在,对于RNA结合蛋白调节下游RNA在肿瘤中的
核心素养是当前数学教学中的热门词汇，是每个学生都应具备的素养和关键能力.文章在主题教学理念的引领下，从知识整体架构出发，突破单一知识点教学的束缚，通过对教学内容的整合，突出教学内容的本质以及知识间的联系，促进学生的数学核心素养不断提升.
为了确定提取、分离纯化黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpa）中花色苷的最佳工艺，了解黑果腺肋花楸中确切的花色苷单体结构及其抗氧化活性。以黑果腺肋花楸果实为原料，采用单因素试验、响应面分析法探究超声波辅助提取花色苷的最佳工艺条件，并利用高速逆流色谱分离纯化出花色苷单体，并对其抗氧化能力进行测定。结果表明：提取分离纯化黑果腺肋花楸中花色苷的最佳提取条件为超声功率125 W、乙醇体积分数为
黑果腺肋花楸（Aronia melanocarpa （Michx.） Elliott.）是多年生灌木。在20世纪90年代从朝鲜引进，具有丰富的食用、药用、观赏等价值。目前，我国对于黑果腺肋花楸引种驯化、快繁技术、区域试验进展迅速。黑果腺肋花楸多倍体植株具有优质、高产、抗性强等特点。本研究综述多种黑果腺肋花楸多倍体诱导及鉴定方法，进一步为黑果腺肋花楸多倍体育种、丰富种质资源提供理论依据。
目的 观察肝胆术后胃肠功能障碍患者采用厚朴排气合剂治疗的临床疗效。方法 选取2019年6月—2021年6月本院收治的80例肝胆术后胃肠功能障碍患者，随机分为治疗组和对照组。对照组患者治疗方案为常规西医治疗，治疗组患者在西医治疗基础上加用厚朴排气合剂。比较2组患者临床治疗总有效率、临床症状改善时间、胃肠功能障碍评分及腹腔压力水平。结果 治疗后，治疗组患者临床治疗总有效率为95.0%，显著高于对照组的
背景与目的:骨肉瘤是一种常见的恶性肿瘤,严重威胁着青少年和儿童的生命。目前,对骨肉瘤最有效的治疗方法是全身化疗联合手术切除。虽然近年随着保肢手术和新辅助化疗的进展,骨肉瘤患者的5年生存率已有明显提高（约65%—70%）,但对于伴有远处转移的骨肉瘤患者而言,5年生存率仅为15%—30%。因此,研究新的骨肉瘤早期诊断和预后指标具有重要意义。自噬是一种由自噬相关基因（autophagy related
多能干细胞（pluripotent stem cells,PSCs）具有自我更新和分化多潜能性,是生物医学和再生医学研究的理想细胞模型。家畜PSCs,在基因编辑动物生产、加速遗传育种改良、濒危动物保护以及建立医学动物模型方面具有巨大的潜力。扩展多能干细胞（extended PSCs,EPSCs）是利用小分子化合物培养基获得的一种新型多能干细胞,具有胚胎和胚外谱系分化潜能。EPSCs已在人、小鼠、牛
对120份谷子种质资源的21个主要农艺性状进行遗传多样性分析、主成分分析以及聚类分析。结果表明，遗传多样性指数以主穗重和主穗粒重最高，均为2.02；变异系数以单株干草重最高，为64.12%。根据谷子种质性状间的遗传差异，对21个主要农艺性状进行主成分分析，得到10个主成分因子累计贡献率达81.777%。通过聚类分析，将谷子种质资源分为6个类群，各类群在生育期、株高、分蘖性、籽粒产量、干草产量等性状
张士卿教授认为敏毒是引起超敏反应性疾病的关键病因，围绕超敏反应性疾病发生、发展及演变，阐述了敏毒的概念以及敏毒伤人后随经络流窜，侵袭官窍、五体、脏腑等处，有着“五类症”（肺系症状、脾胃系症状、肾系症状、肢体经络症状、气血津液症状）“五特性”（暴戾性、广泛性、兼夹性、多变性、顽固性）的临床表现和致病特点等，揭示了敏毒是导致超敏反应性疾病的一类特异性致病因素。张教授将传统中医病因学与现代中医病因学理论