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【目的】
1.明确宫颈癌细胞中eIF4E3与YB1之间是否存在调控关系。
2.探讨宫颈癌细胞中过表达eIF4E3/敲减YB1对E-cadherin的影响。
3.探讨过表达eIF4E3/敲减YB1对宫颈癌细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力的影响。
4.探讨过表达eIF4E3联合敲减YB1对比两个基因单独作用，能否进一步抑制宫颈癌细胞的生物学行为。
【方法】
1.以宫颈癌Hela细胞为研究对象，分别瞬时转染eIF4E3过表达质粒(eIF4E3组)及eIF4E3的小干扰片段(si-eIF4E3组)，用WesternBlotting和qRT-PCR检测eIF4E3与YB1的mRNA和蛋白表达水平。
2.以Hela细胞为研究对象，分别瞬时转染YB1过表达质粒(YB1组)及YB1的小干扰片段(si-YB1组)，用WesternBlotting和qRT-PCR检测eIF4E3与YB1的mRNA和蛋白表达水平。
3.以Hela细胞为研究对象，设eIF4E3组、si-YB1组、eIF4E3+si-YB1组，用WesternBlotting和qRT-PCR检测各组细胞eIF4E3、YB1及E-Cadherin的mRNA和蛋白表达水平。
4.采用CCK-8、平板克隆、Transwell、划痕实验等技术分别检测eIF4E3组、si-YB1组、eIF4E3+si-YB1组癌细胞的增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力。
【结果】
1.在Hela细胞中，eIF4E3对YB1的mRNA和蛋白表达的影响。
(1)与NC组对比，eIF4E3组的eIF4E3、YB1的mRNA水平分别升高了73.06倍(P＜0.05)、0.04倍(P＞0.05)，蛋白水平分别升高0.68倍(P＜0.05)、0.06倍(P＞0.05)；而Mock与NC组在蛋白表达水平上差异无统计学意义(P＞0.05)。
(2)与NC组对比，si-eIF4E3组的eIF4E3、YB1的mRNA水平分别下降了1.00倍(P＜0.05)、升高了0.10倍(P＞0.05)，蛋白水平分别降低0.46倍(P＜0.05)、升高0.04倍(P＞0.05)；而Mock与NC组在蛋白表达水平上差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.在Hela细胞中，YB1对eIF4E3的mRNA和蛋白表达的影响。
(1)与NC组对比，YB1组的YB1、eIF4E3的蛋白水平分别升高0.40倍(P＜0.05)、降低0.01(P＞0.05)。
(2)与NC组对比，si-YB1组的YB1、eIF4E3的mRNA水平分别下降了0.76倍(P＜0.05)、下降了0.04倍(P＞0.05)，蛋白水平分别下降0.28倍(P＜0.05)、升高0.002倍(P＞0.05)。
3.在Hela细胞中，过表达eIF4E3/敲减YB1基因对E-cadherin的mRNA及蛋白表达的影响。与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞E-Cadherin的mRNA水平与NC组之间无明显差异(P＞0.05)。eIF4E3组的eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别升高0.38倍(P＜0.05)、升高0.06倍(P＞0.05)、0.42倍(P＜0.05)；si-YB1组eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别下降0.002倍(P＞0.05)、下降0.29倍(P＜0.05)、升高0.49倍(P＜0.05)；eIF4E3+si-YB1组eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别升高0.43倍(P＜0.05)、下降0.32倍(P＜0.05)、升高0.81倍(P＜0.05)。
4.在Hela细胞中，过表达eIF4E3/敲减YB1基因对细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力的影响。
(1)通过CCK8检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组24h细胞增殖率分别下降16.06%(P＜0.05)、16.17%(P＜0.05)、25.64%(P＜0.05)；48h细胞增殖率分别降低26.15%(P＜0.05)、30.69%(P＜0.05)、45.64%(P＜0.05)；72h细胞增殖率分别降低37.21%(P＜0.05)、38.87%(P＜0.05)、50.59%(P＜0.05)；96h细胞增殖率分别降低16.64%(P＜0.05)、10.17%(P＜0.05)、25.16%(P＜0.05)。另，与eIF4E3组和siYB1组对比，eIF4E3+siYB1组24h细胞增殖率分别降低11.41%(P＜0.05)、11.29%(P＜0.05)；48h细胞增殖率分别降低26.34%(P＜0.05)、21.58%(P＜0.05)；72h细胞增殖率分别降低21.32%(P＜0.05)、19.18%(P＜0.05)；96h细胞增殖率分别降低10.23%(P＜0.05)、16.67%(P＜0.05)。
(2)通过平板克隆形成实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的克隆形成能力分别下降0.28倍(P＜0.05)、0.37倍(P＜0.05)、0.64倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组克隆形成能力分别下降0.50倍(P＜0.05)、0.43倍(P＜0.05)。
(3)通过Transwell实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的侵袭能力分别下降0.30倍(P＜0.05)、0.33倍(P＜0.05)、0.69倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组侵袭能力分别下降0.56倍(P＜0.05)、0.53倍(P＜0.05)。
(4)通过划痕实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的迁移能力分别下降0.40倍(P＜0.05)、0.34倍(P＜0.05)、0.67倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组迁移能力分别下降0.45倍(P＜0.05)、0.50倍(P＜0.05)。
【结论】
1.本文显示在Hela细胞中无论过表达或敲减eIF4E3基因，YB1的mRNA及蛋白水平均不随之而变化；同理过表达或敲减YB1基因，检测eIF4E3的mRNA及蛋白水平也不随之发生变化，说明在Hela细胞中，eIF4E3与YB1基因不存在相互调控关系。
2.本文显示在过表达eIF4E3、敲减YB1及过表达eIF4E3联合敲减YB1后，三组细胞E-Cadherin的mRNA水平均无明显改变，但蛋白水平均出现明显升高，eIF4E3组升高0.42倍、si-YB1组升高0.49倍、eIF4E3+si-YB1组升高0.81倍。说明eIF4E3及YB1基因均在翻译水平调控E-Cadherin的表达，且过表达eIF4E3联合敲减YB1进一步提高E-Cadherin的蛋白表达水平。
3.在宫颈癌Hela细胞中分别过表达eIF4E3、敲减YB1及过表达eIF4E3联合敲减YB1后，三组细胞的增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力均下降，说明以上三种基因干预方案对于宫颈癌Hela细胞的生长均具有抑制作用，且双基因联合处理组对比单基因处理组在宫颈癌细胞生物学行为上的抑制作用表现的更为明显。与前面对E-Cadherin表达的影响一致。
4.综上所述，过表达eIF4E3联合敲减YB1进一步提高E-Cadherin的翻译表达，并显著加强对Hela细胞恶性行为的抑制。
1.明确宫颈癌细胞中eIF4E3与YB1之间是否存在调控关系。
2.探讨宫颈癌细胞中过表达eIF4E3/敲减YB1对E-cadherin的影响。
3.探讨过表达eIF4E3/敲减YB1对宫颈癌细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力的影响。
4.探讨过表达eIF4E3联合敲减YB1对比两个基因单独作用，能否进一步抑制宫颈癌细胞的生物学行为。
【方法】
1.以宫颈癌Hela细胞为研究对象，分别瞬时转染eIF4E3过表达质粒(eIF4E3组)及eIF4E3的小干扰片段(si-eIF4E3组)，用WesternBlotting和qRT-PCR检测eIF4E3与YB1的mRNA和蛋白表达水平。
2.以Hela细胞为研究对象，分别瞬时转染YB1过表达质粒(YB1组)及YB1的小干扰片段(si-YB1组)，用WesternBlotting和qRT-PCR检测eIF4E3与YB1的mRNA和蛋白表达水平。
3.以Hela细胞为研究对象，设eIF4E3组、si-YB1组、eIF4E3+si-YB1组，用WesternBlotting和qRT-PCR检测各组细胞eIF4E3、YB1及E-Cadherin的mRNA和蛋白表达水平。
4.采用CCK-8、平板克隆、Transwell、划痕实验等技术分别检测eIF4E3组、si-YB1组、eIF4E3+si-YB1组癌细胞的增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力。
【结果】
1.在Hela细胞中，eIF4E3对YB1的mRNA和蛋白表达的影响。
(1)与NC组对比，eIF4E3组的eIF4E3、YB1的mRNA水平分别升高了73.06倍(P＜0.05)、0.04倍(P＞0.05)，蛋白水平分别升高0.68倍(P＜0.05)、0.06倍(P＞0.05)；而Mock与NC组在蛋白表达水平上差异无统计学意义(P＞0.05)。
(2)与NC组对比，si-eIF4E3组的eIF4E3、YB1的mRNA水平分别下降了1.00倍(P＜0.05)、升高了0.10倍(P＞0.05)，蛋白水平分别降低0.46倍(P＜0.05)、升高0.04倍(P＞0.05)；而Mock与NC组在蛋白表达水平上差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.在Hela细胞中，YB1对eIF4E3的mRNA和蛋白表达的影响。
(1)与NC组对比，YB1组的YB1、eIF4E3的蛋白水平分别升高0.40倍(P＜0.05)、降低0.01(P＞0.05)。
(2)与NC组对比，si-YB1组的YB1、eIF4E3的mRNA水平分别下降了0.76倍(P＜0.05)、下降了0.04倍(P＞0.05)，蛋白水平分别下降0.28倍(P＜0.05)、升高0.002倍(P＞0.05)。
3.在Hela细胞中，过表达eIF4E3/敲减YB1基因对E-cadherin的mRNA及蛋白表达的影响。与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞E-Cadherin的mRNA水平与NC组之间无明显差异(P＞0.05)。eIF4E3组的eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别升高0.38倍(P＜0.05)、升高0.06倍(P＞0.05)、0.42倍(P＜0.05)；si-YB1组eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别下降0.002倍(P＞0.05)、下降0.29倍(P＜0.05)、升高0.49倍(P＜0.05)；eIF4E3+si-YB1组eIF4E3、YB1及E-Cadherin的蛋白水平分别升高0.43倍(P＜0.05)、下降0.32倍(P＜0.05)、升高0.81倍(P＜0.05)。
4.在Hela细胞中，过表达eIF4E3/敲减YB1基因对细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力的影响。
(1)通过CCK8检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组24h细胞增殖率分别下降16.06%(P＜0.05)、16.17%(P＜0.05)、25.64%(P＜0.05)；48h细胞增殖率分别降低26.15%(P＜0.05)、30.69%(P＜0.05)、45.64%(P＜0.05)；72h细胞增殖率分别降低37.21%(P＜0.05)、38.87%(P＜0.05)、50.59%(P＜0.05)；96h细胞增殖率分别降低16.64%(P＜0.05)、10.17%(P＜0.05)、25.16%(P＜0.05)。另，与eIF4E3组和siYB1组对比，eIF4E3+siYB1组24h细胞增殖率分别降低11.41%(P＜0.05)、11.29%(P＜0.05)；48h细胞增殖率分别降低26.34%(P＜0.05)、21.58%(P＜0.05)；72h细胞增殖率分别降低21.32%(P＜0.05)、19.18%(P＜0.05)；96h细胞增殖率分别降低10.23%(P＜0.05)、16.67%(P＜0.05)。
(2)通过平板克隆形成实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的克隆形成能力分别下降0.28倍(P＜0.05)、0.37倍(P＜0.05)、0.64倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组克隆形成能力分别下降0.50倍(P＜0.05)、0.43倍(P＜0.05)。
(3)通过Transwell实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的侵袭能力分别下降0.30倍(P＜0.05)、0.33倍(P＜0.05)、0.69倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组侵袭能力分别下降0.56倍(P＜0.05)、0.53倍(P＜0.05)。
(4)通过划痕实验检测，与NC组对比，eIF4E3组、si-YB1组及eIF4E3+si-YB1组细胞的迁移能力分别下降0.40倍(P＜0.05)、0.34倍(P＜0.05)、0.67倍(P＜0.05)。另，与eIF4E3组及si-YB1组对比，eIF4E3+si-YB1组迁移能力分别下降0.45倍(P＜0.05)、0.50倍(P＜0.05)。
【结论】
1.本文显示在Hela细胞中无论过表达或敲减eIF4E3基因，YB1的mRNA及蛋白水平均不随之而变化；同理过表达或敲减YB1基因，检测eIF4E3的mRNA及蛋白水平也不随之发生变化，说明在Hela细胞中，eIF4E3与YB1基因不存在相互调控关系。
2.本文显示在过表达eIF4E3、敲减YB1及过表达eIF4E3联合敲减YB1后，三组细胞E-Cadherin的mRNA水平均无明显改变，但蛋白水平均出现明显升高，eIF4E3组升高0.42倍、si-YB1组升高0.49倍、eIF4E3+si-YB1组升高0.81倍。说明eIF4E3及YB1基因均在翻译水平调控E-Cadherin的表达，且过表达eIF4E3联合敲减YB1进一步提高E-Cadherin的蛋白表达水平。
3.在宫颈癌Hela细胞中分别过表达eIF4E3、敲减YB1及过表达eIF4E3联合敲减YB1后，三组细胞的增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力均下降，说明以上三种基因干预方案对于宫颈癌Hela细胞的生长均具有抑制作用，且双基因联合处理组对比单基因处理组在宫颈癌细胞生物学行为上的抑制作用表现的更为明显。与前面对E-Cadherin表达的影响一致。
4.综上所述，过表达eIF4E3联合敲减YB1进一步提高E-Cadherin的翻译表达，并显著加强对Hela细胞恶性行为的抑制。