论文部分内容阅读
鲶鱼体表粘液中的抗菌肽是鱼体自身免疫的第一道屏障,具有良好的抑菌活性。本论文选取鲶鱼体表粘液作为研究对象,建立了鲶鱼体表粘液抗菌肽的分离纯化方法,获得了鲶鱼体表粘液抗菌肽的氨基酸序列,并以腐败希瓦氏菌、荧光假单胞菌和蜡样芽孢杆菌为靶标菌,探讨了鲶鱼体表粘液抗菌肽的抑菌机理,并在实际贮藏保鲜中验证了所获得的抗菌肽的保鲜效果。主要研究结果如下:(1)健康活体鲶鱼体表粘液,经提取剂(0.2 M乙酸钠,0.2%Triton X-100,1 mM苯甲磺酰氟的水溶液)提取,过C18固相萃取柱分离,筛选有抑菌活性的组分,再经过制备级液相色谱和分析型液相色谱多次分离纯化,得到鲶鱼体表粘液抗菌肽。(2)通过轨道阱质谱(Q Exactive)鉴定,获得了 4个氨基酸片段,分别为:片段1,RLKEKNKA,分子量 759.5 Da;片段2,RIVELTLPRVSVRL,分子量1381.9 U;片段3,KQEIILKF,分子量 743.5 U;片段 4,RQIKIXRR,分子量 786.5 U。(3)以腐败希瓦氏菌、荧光假单胞菌和蜡样芽孢杆菌为靶标菌,研究鲶鱼体表粘液抗菌肽的抑菌机理。鲶鱼体表粘液抗菌肽能够显著改变细菌的生长情况;通过扫描电镜观察抗菌肽处理可导致菌体干瘪、扭曲变形、表面凹陷、形成孔洞、细胞内容物流出和菌体裂解等现象;抗菌肽处理能够明显降低细菌的Na+K+-ATP酶、AKP酶活性;能够损伤细菌的细胞内膜和外膜;同时能够改变细菌的可溶性总蛋白和可溶性膜蛋白组成。(4)用鲶鱼体表粘液抗菌肽溶液(0.5%,w/v)处理新鲜草鱼鱼片,空气包装后4℃贮藏。与空白组相比抗菌肽处理能够明显抑制菌落总数、产H2S细菌和荧光假单胞菌的增长;能够显著改善贮藏期间pH值、TVB-N值、K值、表面颜色、质构特性和挥发性气味等鲜度表征指标;对4℃贮藏期间草鱼肌肉的自由水、结合水和不易流动水的分布及其迁移率没有显著影响;与同样来自鱼类的抗菌物质鱼精蛋白相比,鲶鱼体表粘液抗菌肽对产H2S细菌和含硫挥发性气味成分的抑制能力较弱,但对菌落总数的抑制更持久,对荧光假单胞菌的抑制能力更强,能够更好的控制TVB-N值和K值的增加,还能更好的抑制氮氧化合物和乙醇等挥发性气味成分的产生。