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猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是危害养猪业的重要病毒病,临床表现以母猪的繁殖障碍、仔猪与成年猪的呼吸障碍为主要特征。2006年我国暴发了高致病性PRRSV（HP-PRRSV）,更是对养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV高度易变,加上我国批准使用的弱毒疫苗毒株较多,导致田间野毒与疫苗毒的重组现象频发,新的变异毒株不断出现,使我国PRRSV的防治面临巨大挑战。尽管弱毒疫苗有一定的免疫保护,但是在诱导交叉免疫,以及区分疫苗免疫与自然感染方面仍然存在很多问题。研究PRRSV基因缺失标记致弱毒,有可能为解决上述问题提供线索。非结构蛋白2（NSP2）是PRRSV基因组编码的一种高度变异性的蛋白,其中间的高变区可耐受碱基突变、插入以及大片段的缺失,而且,越来越多的证据显示PRRSV NSP2的变异与病毒的致病性有关,因此,NSP2是研究基因缺失标记致弱毒的重要候选区域。本实验室前期利用PRRSV/GSWW/2015毒株的感染性克隆成功构建了缺失NSP2第519-565位氨基酸的毒株（命名为D5）,在此基础上,参照近年来的PRRSV流行毒株TJM疫苗株的自然缺失区域,分别构建NSP2第467-570位（pGA-AB-D13）和第628-747位（pGS-AB-D14）氨基酸缺失的全长分子克隆,将全长质粒线性化后体外转录获得全长RNA,然后转染Marc-145细胞拯救病毒。实验结果表明D13缺失未能拯救到病毒,D14缺失可拯救到病毒,说明NSP2第628-747位氨基酸缺失不影响病毒的复制。将D14拯救病毒在Marc-145细胞上连续传40代,通过RT-PCR与测序证明缺失区域稳定存在。对比测定了D5、D14缺失毒与亲本病毒在Marc-145细胞中的复制能力,分别测定了TCID50与复制动力曲线,结果显示,拯救病毒具有与亲本病毒相似的生长特性,D14相对于D5缺失病毒与亲本病毒的复制水平有所降低,但三者之间并无显著差异。为了确定不同NSP2区域缺失对相关细胞因子表达水平的影响,将亲本病毒、D5与D14缺失毒株分别感染猪肺泡巨噬细胞（PAM）,于不同时间点检测了相关细胞因子mRNA的表达水平。结果表明,相对于亲本毒与D14缺失病毒,D5缺失病毒感染PAM细胞24h后的IL-6、TNF-α、IL-8与IL-1β表达水平显著升高（P<0.05）;相对于亲本毒,D5与D14缺失毒株于感染PAM后12h时间点检测的IL-10与HMGB1水平显著降低（P<0.05）,且D14的降低幅度更为显著,提示NSP2第519-565位氨基酸缺失有促进早期炎性应答的作用,而NSP2第519-565位与第628-747位双缺失显著降低了IL-10抑制性细胞因子和晚期炎性因子HMGB1的表达水平（P<0.05）。说明NSP2在调节炎性应答与免疫抑制方面均具有一定的作用。